intronbio 25021說明書
i-Taq™ DNA Polymerase
i-Taq™DNA聚合酶
Cat.No | Capacity |
25021 | 250 unit |
25022 | 500 unit |
產(chǎn)品信息
描述
高純度i-Taq™PCR核心試劑盒，無論模板類型和反應(yīng)條件如何，均可顯示穩(wěn)定，的DNA擴(kuò)增
i-Taq™DNA聚合酶是一種94kDa的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，通過克隆Thermus aquaticus（菌株YT1）的聚合酶基因在大腸桿菌中表達(dá)。它去除了大腸桿菌來源的蛋白質(zhì)和DNA，它可以作為PCR中的污染物，是穩(wěn)定有效的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。基因組DNA，cDNA等可以擴(kuò)增至5Kb。PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）是通過特異性重復(fù)特定DNA位點(diǎn)的合成來擴(kuò)增試管中所需DNA分子的方法。結(jié)果，可以使用非常少量的DNA合成大量的DNA。當(dāng)然，它廣泛用于基礎(chǔ)生物學(xué)，醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域。我們現(xiàn)在正在簡單快捷地?cái)U(kuò)大其在法醫(yī)，食品，環(huán)境衛(wèi)生和動(dòng)植物檢驗(yàn)領(lǐng)域的使用范圍。58體外-10 倍。擴(kuò)增的DNA可用于如下的各種實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以應(yīng)用各種醫(yī)學(xué)研究。在開發(fā)該方法的早期，使用大腸桿菌DNA聚合物進(jìn)行PCR，因此必須在每次變性時(shí)補(bǔ)充變性大腸桿菌的DNA聚合酶。然而，通過在PCR中使用從Thermus aquaticus分離的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，我們不必每一步都做補(bǔ)充酶的麻煩任務(wù)。結(jié)果，PCR成為分子生物學(xué)*的方法。PCR具有一系列三個(gè)步驟并重復(fù)30至40次。
PCR的步是DNA的變性，通過加熱分離兩條DNA鏈。每個(gè)分離的DNA用作模板，變性溫度取決于DNA中G + C的量和長度。PCR的第二步是退火。在此階段，引物與模板DNA結(jié)合，退火溫度是決定反應(yīng)準(zhǔn)確性的重要因素。如果溫度太高，引物將與模板DNA結(jié)合得太弱。如果溫度太低，可以擴(kuò)增不需要的DNA，因?yàn)橐锓翘禺愋越Y(jié)合。PCR的第三步是延伸步驟。在這個(gè)階段，耐熱DNA聚合酶將從模板DNA產(chǎn)生新的DNA。i-Taq™DNA聚合酶除高純度酶外，通過優(yōu)化緩沖液組合物以顯示良聚合酶活性，無論模板類型或模板的一半，都可以獲得高度可重復(fù)的結(jié)果。由于用該酶擴(kuò)增的大多數(shù)產(chǎn)物在3端具有堿基A，因此可以將PCR產(chǎn)物原樣克隆到T載體中。它也可以通過用DNA聚合酶如Klenow DNA聚合酶或T4 DNA聚合酶填充它而將其磷酸化成平末端而克隆到平端載體中。
應(yīng)用
套件內(nèi)容
| 內(nèi)容 | 250個(gè)單位 | 500個(gè)單位 |
|---|---|---|
| i-Taq™DNA聚合酶（5U / ml） | 250單位×1管 | 500單位×1管 |
| 10×PCR緩沖液（含20 mM MgCl2） | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 10×MgCl 2游離PCR緩沖液 | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 10 mM dNTPs（2.5 mM /每個(gè)） | 500μl×1管 | 1毫升×1管 |
| 25mM MgCl 22 | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 手冊 | 1 ea | 1 ea |
技術(shù)數(shù)據(jù)
靈敏度比較數(shù)據(jù)（與其他公司比較）
i-Taq TM DNA聚合酶與公司A，B相同功能的DNA聚合酶的靈敏度比較。在該實(shí)驗(yàn)中，通過濃縮稀釋牛gDNA并用CSF引物擴(kuò)增。
泳道M，100bp DNA標(biāo)記; 泳道1,1ng gDNA; 泳道2,100pg gDNA; 泳道3,10pg gDNA; 泳道4,1 gg gDNA; 泳道5,100fg gDNA; 泳道N，陰性對照
批次穩(wěn)定性數(shù)據(jù)
確認(rèn)了每批i-Taq TM DNA聚合酶的靈敏度活性。從連續(xù)稀釋的SNU-1 cDNA和λDNA中擴(kuò)增GAPDH（575bp）和1Kb片段以確認(rèn)靈敏度。使用1單位的i-Taq TM DNA聚合酶擴(kuò)增總共20ml反應(yīng)混合物，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析5ml。
泳道M，100bp DNA標(biāo)記; 1 Kb DNA標(biāo)記; 泳道N，陰性對照
