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            ChromoTek介紹

             更新時間:2019-05-08 點擊量:2630

             

            ChromoTek介紹

            德國ChromoTek公司成立于2008年,致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發(fā)與研究,公司擁有強大的研發(fā)團隊,有先進的生物制劑,主要主要使命是花費較少的時間和成本,使客戶獲得得高質量的實驗數據。

             

            德國ChromoTek公司 聯合中國專業(yè)的生物技術服務提供商-BioTNT,針對中國市場的實際情況,推出全世界可靠的GFP 相關產品。

             

            ChromoTek的產品分類:

             

            一、Nano-Trap系列;以產品結合物為標準,包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列,還有96板系列;抗體結合物包括GFP Trap,RFP Trap,GST Trap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap

            二、 Booster系列;含GFP booster RFP booster;

            三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質粒或細胞系形式);

            四、  高品質抗體(標簽蛋白抗體和普通抗體);

             

            產品一

            GFP-Trap?  —— 值得信賴的科研工具

            Nano-Trap:agarose beads或者magnetic beads結合,在免疫沉淀或蛋白質相互作用的實驗中,可抓取或純化GFP或RPF融合蛋白。 (優(yōu)點:三好三多)

            優(yōu)點一:抗體好---------Nano-Traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段VHHS;具有分子量?。?5Kda)、穩(wěn)定(70℃仍保持穩(wěn)定),高親和力(高特異性性結合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點;GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65T,TagGFP,不與RFP衍生蛋白結合。

            優(yōu)點二:形式好-------抗體結合了agarose beads(瓊脂糖珠子)或者magnetic beads(磁珠),在IP實驗,COIP ,pulldown,Chip實驗中可以直接取代特異性GFP 抗體+proteinA/G 瓊脂糖珠子;

            優(yōu)點三:效果好------孵化時間短(只需5-30min),能夠更好與結合,從細胞提取物或細胞器中定量分離GFP融合蛋白及結合因子

            優(yōu)點四:實驗應用多:被廣泛用于免疫沉淀、質譜分析、酶活測定、生物大分子相互作用/親和力實驗、染色質免疫沉淀(ChIP)、蛋白質相互作用分析;

            優(yōu)點五:產品多:有GFP Trap,RFP Trap,GST Trap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品,給您提供更多的科研工具!GFP,RFP,GST Trap作為標簽蛋白的特異性純化方法,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap 是用于純化目的蛋白。

            優(yōu)點六:樣品類型多:mammalian cells(哺乳細胞);tissues/ organisms(組織/器官樣本);bacteria(細菌);yeast (酵母);plants (植物樣本)

             

            僅需六個步驟,30min 僅需6個步驟,30min 實驗,Chromotek GFP-Trap?_A5大實驗應用


             →→ →收集細胞     細胞裂解      平衡beads      結合蛋白 ,加入裂解的細胞   →    清洗beads   →  洗脫蛋白

             

             

             

            免疫沉淀

            酶活測定

            Co-IP

            Pull down

            ChIP

            后期實驗

            Western blot

            酶活測定

            沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠,western blot鑒定預測作用蛋白Y,或樣品利用質譜后續(xù)分析。

            洗脫的復合物;同時進行GFP和第二標簽western blot 實驗。

            交聯反應逆轉,DNA純化,DNA鑒定(如用QPCR 或者chip實驗),同普通CHIP   實驗

            nano trap替代的產品

            GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

            GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

            GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

            GST   標簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠

            GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

            目的

            弱GFP蛋白樣品的富集;或后期實驗

            可以用beads直接測定酶活

            蛋白-蛋白相互作用,一般驗證體內的蛋白互作

            蛋白-蛋白相互作用,一般驗證體外的蛋白互作

            蛋白-DNA相互作用

             

             

            (1實驗不同,裂解的細胞不同;pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二標簽融合蛋白的裂解物;chip實驗為細胞固定步驟,染色質斷裂步驟;

            實驗不同,加入的裂解物不同;chip實驗加入的為斷裂的DNA-蛋白復合物;

             

            (2) GFP-Trap 用于IP 實驗(Immunoprecipitation)(免疫沉淀)Co-IP 實驗(免疫共沉淀) :

             

            Co-IP 實驗(Co-Immunoprecipitation)(免疫共沉淀)原理圖

             

             

            傳統(tǒng)IP

            GFP-Trap用于IP

            傳統(tǒng)Co-IP

            GFP-Trap用于Co-IP

             

            A

            B

            C

            D

            實驗原理

            抗體與細胞裂解液或上清中相應蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯的agarose珠子孵育,得到蛋白復合物,洗脫蛋白。

            細胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白與GFP-Trap孵育,得到蛋白復合物,洗脫蛋白。

            細胞非變性條件下裂解,完整胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。結合的實驗原理同A/B

            目的

            得到純化的蛋白或進行后期實驗

            同A

            研究蛋白質相互作用

            后期實驗

            洗脫的蛋白采用SDS-Page 跑膠,采用GFP 抗體western blot進行鑒定。

            沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠,western blot 鑒定,也可利用質譜進行后續(xù)分析。

            時間

            長,超過一天

            短,30min

            同A

            同B

            步驟

            多,超過20個步驟

            少,僅需6個步驟

            同A

            同B

            特異性

            普通抗體特異性不高

            羊駝抗體,特異性高

            同A

            同B

            使用產品

            可選用特異性抗體 或GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

            GFP抗體-瓊脂糖珠子,RFP-Trap,GST-Trap,Dnmt1-Trap

            同A

            同B

            適用性

            通用方法,適合面寬

            有GFP,RFP,GST,Dnmt1-Trap等4個品種的標簽蛋白Trap 可選

            同A

            同B

            產物

            純度不高

            純度高,對比見下左圖

             

             

             

             


             

            Nano-Traps主要產品見表:

              

             

             

            品牌

            貨號

            品名

            規(guī)格

            價格

            GFP-Trap?

            Chromo tek

            gta-10

            GFP-Trap?, coupled to agarose

            10 rxns

            2000

            Chromo tek

            gta-20

            GFP-Trap?, coupled to agarose

            20 rxns

            6700

            Chromo tek

            gta-100

            GFP-Trap?, coupled to agarose

            100 rxns

            27090

            Chromo tek

            gta-200

            GFP-Trap? coupled to agarose

            200 rxns

            48240

            Chromo tek

            gta-400

            GFP-Trap? coupled to agarose

            400 rxns

            84330

            Chromo tek

            gtak-20

            GFP-Trap? coupled to agarose kit

            20 rxns

            8400

            Chromo tek

            gtm-20

            GFP-Trap? coupled to magnetic beads

            20 rxns

            6700

            Chromo tek

            gtm-100

            GFP-Trap? coupled to magnetic beads

            100 rxns

            27090

            Chromo tek

            gtm-200

            GFP-Trap? coupled to magnetic beads

            200 rxns

            5360

            Chromo tek

            gtp-96

            GFP-multiTrap?, black 96 well plate

            1 pc

            4100

            Chromo tek

            gtp-96

            GFP-multiTrap?, black 96 well plate

            5 pc

            15600

            Chromo tek

            gtm-400

            GFP-Trap? coupled to magnetic beads

            400 rxns

            84330

            Chromo tek

            gtmk-20

            GFP-Trap? coupled to magnetic beads kit

            20 rxns

            8400

            Chromo tek

            gt-250

            GFP-Trap? free protein

            250 μg

            4500

            RFP-Trap?

            Chromo tek

            rta 10

            RFP-Trap?, coupled to agarose

            10rxns

            2000

            Chromo tek

            rta 20

            RFP-Trap?, coupled to agarose

            20rxns

            6700

            Chromo tek

            rta 100

            RFP-Trap?, coupled to agarose

            100 rxns

            27090

            Chromo tek

            rta200

            RFP-Trap?, coupled to agarose

            200rxns

            5360

            Chromo tek

            rta 400

            RFP-Trap?, coupled to agarose

            400rxns

            84330

            Chromo tek

            rtak-20

            RFP-Trap?, coupled to agarose,

            20 rxns

            8400

            Chromo tek

            rt-250

            RFP-Trap?, free protein

            250 μg

            4500

             GST-Trap

            Chromo tek

            stm-10

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads

            10 rxns

            2000

            Chromo tek

            stm-20

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads

            20 rxns

            6700

            Chromo tek

            stm-100

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads

            100 rxns

            27090

            Chromo tek

            stm-200

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads

            200 rxns

            48240

            Chromo tek

            stm-400

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads

            400 rxns

            84330

            Chromo tek

            stmk-20

            GST-Trap?, coupled to magnetic beads, kit

            20 rxns

            8400

            Chromo tek

            st-250

            GST-Trap?, free protein

            250 μg

            4500

            Dnmt1-Trap

            Chromo tek

            dta-10

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose

            10 rxns

            2000

            Chromo tek

            dta-20

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose

            20 rxns

            6700

            Chromo tek

            dta-100

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose

            100 rxns

            27090

            Chromo tek

            dta-200

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose

            200 rxns

            48240

            Chromo tek

            dta-400

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose

            400 rxns

            84330

            Chromo tek

            dtak-20

            Dnmt1-Trap, coupled to agarose, kit

            20rxns

            8400

            Chromo tek

            dt-250

            Dnmt1-Trap,freeprotein

            250μg

            4500

            Binding Controls

            Chromo tek

            bab-20

            Blocked agarose beads (binding control)

            500 μl (20 rxns)

            1500

            Chromo tek

            bmp-20

            Blocked magnetic particles ( binding control)

            500 μ l ( 20 rxns)

            1500

             

             

            產品二:

             

             

             

            Nano-booster是利用Atto公司的熒光素共價結合到特異性GFP抗體上;當GFP 融合蛋白信號比較弱的時候,或者熒光蛋白變性后,具有再激活的作用。

             

            在研究活細胞中蛋白定位和動力學的過程中是不是會有如下的困惑:

             

            1.固定樣品中細胞表達的熒光融合蛋白信號強度在生理表達水平通常很低?

            2.熒光蛋白的耐光性和量子效率達不到超分辨顯微鏡的要求(如:3D-SIM, STED或 STORM/ PALM)?

            3.許多細胞生物學方法如Hcl處理的BrdU檢測,EdU-Click-It處理或者熱變性的熒光原位雜交(FISH)會干擾熒光融合蛋白信號的檢測,需要重新激活GFP 信號?

             

             

            優(yōu)點:

            優(yōu)點一:抗體好---------Nano-Boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段VHHS;具有分子量小(15Kda)、穩(wěn)定(70℃仍保持穩(wěn)定),高親和力(高特異性性結合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點;GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65T,TagGFP,不與RFP衍生蛋白結合。

            優(yōu)點二:Atto公司的熒光素,具有增強熒光的作用;

            優(yōu)點三:作用效果好:

            1、作為熒光增強劑使用;

            2、對變性熒光蛋白具有再激活作用;

            3、不僅能夠增強信號,還能夠增加熒光蛋白熒光穩(wěn)定性。

             

            優(yōu)點四:產品多:不僅有GFP booster,還有RFP booster;

             

            Nano Booster 產品應用:

            1、產品實驗方法:免疫熒光(IF),免疫組化(IHC);

            2、產品使用材料:細胞系,組織切片;

            3、產品應用方向:熒光顯微鏡,激光共聚焦顯微鏡,超分辨率顯微鏡(3D-SIM,PALM, STED,STORM);

            實驗結果改進示例:

            實驗應用:

             

            上圖:比較 HeLa 細胞系核表達的GFP-融合蛋白,GFP 信號增強(G FP-Booster_Atto488使用前和使用后)由用戶確定適當的稀釋倍數。

            EdU-Click-iT? 處理會導致GFP 信號的毀壞。 GFP-Booster標記了GFP 融合蛋白,因此有激活和加強熒光信號的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。下圖:GFP-Dnmt1 融合蛋白,三色熒光檢測,同時檢測  紅色:5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信號;綠色,結合了GFP Booster 信號;藍色,DAPI 信號(在EdU-Click-iT? 處理后GFP Booster)

             

             

            Nano-booster主要產品見下表:

             

             

             

            貨號

            品名

            規(guī)格

            價格

            GFP-Booster

            Chromo tek

            gba488-TS

            GFP-Booster_atto488-TS

            50 μg

            2500

            Chromo tek

            gba488

            GFP-Booster_atto488

            100 μg

            5400

            Chromo tek

            gba-647N

            GFP-Booster-Atto 647N

            100 μg

            詢價

            Chromo tek

            gbdl-650-TS

            GFP-Booster- Atto 647N

            50 μg

            詢價

            Chromo tek

            gba-594

            GFP-Booster-Atto 594

            100 μg

            詢價

            RFP-Booster

            Chromo tek

            rba594-TS

            RFP Booster atto594 TS

            50u g

            2500

            Chromo tek

            rba594

            RFP-Booster_atto594

            100 μg

            5400

            Chromo tek

            rbdl-650-TS

            RFP-Booster- Atto 650ts

            50 μg

            詢價

            Chromo tek

            rba-700

            RFP-Booster-Atto 700

            100 μg

            詢價

            Chromo tek

            rba-488

            RFP-Booster-Atto 488

            100 μg

            詢價

             

             

            備注:Invtrogen新推出的Click-iT? EdU檢測也是以檢測新合成DNA中摻入的核苷類似物為基礎,但該方法所采用的核苷類似物是EdU,而且不是通過抗體檢測,而是基于一個click反應 --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應。Click-iT檢測避免了BrdU檢測所需的苛刻處理條件,可避免DNA變性,維持樣本的形態(tài),因而提供了一種更可靠且更簡單的方法進行細胞增殖檢測。

             

            DAPI,是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料,常用與熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜,它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下,DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當DAPI與雙股DNA結合時,大吸收波長為358nm,大發(fā)射波長為461nm,其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。 所以不會影響綠色熒光蛋白的觀測。

             

            產品三:Chromobodies

             

            ChromoTek公司的Chromobodies?是一種新的極其微小的細胞內功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結合域結構(VHH)。和普通抗體不同的是,這些創(chuàng)新的熒光納米探針可以使活細胞的結構和進程實時分析和可視化。因此,Chromobodies是做研究細胞內研究包含高含量分析(HCA)的一種新的理想試劑。

             

            除了穩(wěn)定細胞株,你也可以得到Chromobody?質粒,它允許你創(chuàng)建自己的細胞系或瞬時表達Chromobody?。

             

            所有Chromobody?結合域都是經過精心挑選,以不干擾內源性蛋白質的功能,并提供了*的機會來標記活細胞中天然蛋白。

             

            產品形式:質?;蛘呒毎诞a品。

             

             

            Chromobodies系列產品見下表:

             

            Actin Chromobody

             

            貨號

            Chromo tek

            品名

            規(guī)格

            價格

            dcg

            Chromo tek

            Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP

            20μg

            14900

            dcr

            Chromo tek

            Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP

            20μg

            14900

            ccg

            Chromo tek

            Cell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP

            20 μg

            14900

            ccr

            Chromo tek

            Cell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP

            20 μg

            14900

            lcg

            Chromo tek

            Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP

            20 μg

            14900

            lcr

            Chromo tek

            Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP

            20 μg

            14900

            acg

            Chromo tek

            Actin Chromobody? plasmid, αActin-GFP

            20 μg

            14900

            acr

            Chromo tek

            Actin Chromobody? plasmid, αActin-RFP

            20 μg

            14900

             

             

            產品系列四:

            ChromoTek推出一系列高質量常見抗體見下表:

             

            熒光標簽抗體

             

            貨號

            品牌

            品名

            規(guī)格

            價格

            3f5

            Chromo tek

            RFP antibody mouse monoclonal

            100 μg

            3900

            5f8

            Chromo tek

            RFP antibody rat monoclonal

            100 μg

            3900

            3h9

            Chromo tek

            GFP antibody, rat monoclonal

            100 μg

            3900

             

             

            標簽抗體

             

            貨號

            品牌

            品名

            規(guī)格

            價格

            6g9

            Chromo tek

            GST antibody, rat monoclonal

            100 μ l

            3900

            6f7

            Chromo tek

            FLAG antibody, rat monoclonal

            100 μg

            3900

            9E1

            Chromo tek

            c-Myc antibody, rat monoclonal

            100 μg

            3900

            7c9

            Chromo tek

            HA antibody, rat monoclonal

            100 μg

            3900

             

             

            目的蛋白抗體

             

            貨號

            品牌

            品名

            規(guī)格

            價格

            2e8

            Chromo tek

            Dnmt1antibody,ratmonoclonal

            500μl

            4900

            2e8ts

            Chromo tek

            Dnmt1antibody,ratmonoclonal

            125μl

            2000

            16d10

            Chromo tek

            PCNA antibody rat monoclonal

            100 μg

            4900

            16d10ts

            Chromo tek

            PCNA antibody rat monoclonal

            25 μg

            2000

            4b8

            Chromo tek

            Ago1 antibody, rat monoclonal

            100 μg

            5400

            4b8ts

            Chromo tek

            Ago1 antibody, rat monoclonal

            25 μg

            2000

            11a9

            Chromo tek

            Ago2 antibody, rat monoclonal

            100 μg

            5400

            11a9ts

            Chromo tek

            Ago2 antibody, rat monoclonal

            25 μg

            2000

            1c7

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD

            5 ml

            5400

            1c7ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD

            1 ml

            2000

            3d12

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1

            5 ml

            5400

            3d12ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1

            1 ml

            2000

            3e10

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 2

            5 ml

            5400

            3e10ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 2

            1 ml

            2000

            6d7

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4

            5 ml

            5400

            6d7ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4

            1 ml

            2000

            3e8

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 5

            5 ml

            5400

            3e8ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 5

            1 ml

            2000

            4e12

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 7

            5 ml

            5400

            4e12ts

            Chromo tek

            RNA Pol II CTD, phos. Serine 7

            1 ml

            2000

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