上海起發(fā)FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP說明書

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gene bridges A004

FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP

Pro- and eukaryotic neomycin selection cassette flanked by FRT-sites and one additional downstream loxP site

原核和真核新霉素選擇盒兩側(cè)有frt位點(diǎn)和一個額外的下游loxp位點(diǎn)。

• ID: A004

描述

設(shè)計PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板以分別在原核和真核細(xì)胞中選擇卡那霉素/新霉素。

它結(jié)合了用于在大腸桿菌中表達(dá)卡那霉素抗性的原核啟動子（gb2）和用于在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)新霉素抗性的真核啟動子（PGK）。原核啟動子gb2是Em7啟動子的略微修飾形式; 它比通常使用的Tn5啟動子介導(dǎo)更高的轉(zhuǎn)錄效率。小鼠磷酸葡萄糖激酶基因（PGK）的啟動子用作真核啟動子。合成的多腺苷酸化信號終止卡那霉素/新霉素表達(dá)。盒子側(cè)翼為FRT位點(diǎn)，以便隨后通過Flp重組酶切除。另外的單個loxP位點(diǎn)位于盒的3'末端。*不是我和Xho我的位點(diǎn)位于盒子側(cè)面，便于克隆限制性位點(diǎn)。使用提供的PCR模板，可以容易地產(chǎn)生側(cè)翼為任何其他限制性位點(diǎn)的PGK-gb2-neo-FRT-loxP盒，以將盒克隆到所選擇的載體中。可以通過在PCR引物中添加相應(yīng)的序列來引入限制性位點(diǎn)。該模板可以容易地用于產(chǎn)生由Red / ET重組介導(dǎo)的靶向構(gòu)建體。

PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板不是線性的，而是基于質(zhì)粒的（大小為3,485bp）。由于其R6K起源，質(zhì)粒不能在大多數(shù)大腸桿菌菌株中復(fù)制。因此PCR產(chǎn)物可以直接用于下游應(yīng)用而無需任何進(jìn)一步純化。使用每個反應(yīng)1μl作為模板，可以進(jìn)行至少20次PCR反應(yīng)。

內(nèi)容

• FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP：PCR模板（50 ng/μl，20μl）

• 手冊

序列

FRT-PGK-GB2-NEO-FRT-的loxP

FRT  啟動子  neo ^R   loxP  終止子
 

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGAGAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTTTTTTGGGGGGGG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC AAGCTT ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTA TCTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA