biolegend 640952說明書

Biolegend公司的試劑主要包括細胞免疫、細胞因子、趨化因子、粘附因子等與癌癥研究、T調節(jié)細胞研究、干細胞研究、先天免疫研究、細胞周期分析、凋亡研究及特定修飾類抗體等領域相關的試劑，用于流式、ELISA、免疫沉淀、WB、免疫熒光、免疫組化及體內體外功能學試驗。其中，Biolegend公司的流式抗體以其具有較寬范圍的熒光選擇及較高的性價比，為廣大科研工作者所接受！同時，公司配備了一支經驗豐富的技術服務隊伍，為客戶提供的配色方案及快速的售后處理服務！

biolegend 640952說明書

APC / Fire™750 Annexin V.

其他名稱   Annexin A5

描述

膜聯蛋白V（或膜聯蛋白A5）是細胞內蛋白質的膜聯蛋白家族的成員，其以鈣依賴性方式結合磷脂酰絲氨酸（PS）。PS通常僅在健康細胞中的質膜細胞內小葉上發(fā)現，但在早期細胞凋亡期間，膜不對稱性喪失并且PS易位至外部小葉。然后熒光染料標記的膜聯蛋白V可用于特異性靶向和鑒定凋亡細胞。Annexin V結合緩沖液（目錄號422201）推薦用于膜聯蛋白V染色。單獨的膜聯蛋白V結合不能區(qū)分凋亡細胞和壞死細胞。因此，我們建議使用我們的Helix NP™Blue（目錄號425305），Helix NP™Green（目錄號425303）或Helix NP™NIR（目錄號425301）。早期凋亡細胞將排除7-AAD和PI，

人T白血病細胞系Jurkat，用BioLegend的抗人CD95（EOS9.1）mAb（cat.305704）在37℃處理（左）或未處理（右）4小時，然后用膜聯蛋白V-APC染色/ Fire TM 750和Helix NP Green（cat.425303,1.25nM）在37℃下在膜聯蛋白結合緩沖液中15分鐘。 

產品詳情：

反應

所有哺乳動物物種

公式

磷酸鹽緩沖溶液，pH 7.2，含有0.09％Sodium azide和0.2％（w / v）BSA（來自美國）。

制備

通過親和層析純化抗體，并在適宜條件下與APC / Fire TM 750綴合。該溶液不含未綴合的APC / Fire TM 750和未綴合的抗體。

濃度

批次特定（請聯系技術支持以獲得濃度和總μg量，或者如果您有批號，請使用我們的查找工具。）

存儲和處理

抗體溶液應在2°C至8°C之間進行稀釋，并避免長時間暴露在光線下。不要凍結。

應用

FC - 質量測試

推薦用法

通過流式細胞術分析的免疫熒光染色對該產品的每批產品進行質量控制測試。對于流式細胞術應用，建議在100μl體積的膜聯蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）中使用該試劑為每100,000,000,000個細胞5-15μg。建議滴定試劑以獲得每種應用的良性能。

* APC / Fire™750的大激發(fā)波長為650 nm，大發(fā)射波長為787 nm。

激發(fā)激光

紅色激光（633 nm）

應用筆記

膜聯蛋白V染色 
1.用冷BioLegend細胞染色緩沖液（目錄號420201）洗滌細胞兩次，然后以1×10 ⁶  細胞/ ml 的濃度將細胞重懸于膜聯蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）中。
2.將100μl細胞懸浮液轉移到5ml試管中。
3.加入5μlAPC/ Fire TM 750膜聯蛋白V. 
4.加入10μlPI溶液（目錄號421301）或7-AAD（目錄號420403/420404）。 
5.輕輕渦旋細胞，在室溫（25°C），黑暗中孵育15分鐘。 
6.向每個管中加入400μl膜聯蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）。通過流式細胞術分析。

申請參考

（PubMed鏈接表示BioLegend引文）

1. Koopman G，et al。1994年血液 84：1415。
2. Vermes I，et al。1995. J. Immunol。方法 184：39。
3. Dachary-Prigent J，et al。1993. Blood 81：2554。
4. Sekine C，et al。2009. Int Immunol。
5. Grujic M，et al。2010. J. Immunol。185：1730

抗原詳細信息

生物學領域

細胞凋亡/腫瘤抑制因子/細胞死亡，細胞生物學，神經科學

相關常見問題

我可以凍結膜聯蛋白V結合物嗎？

它不應該被凍結，因為它會導致由于二聚化而喪失生物活性。

膜聯蛋白V染色期間可以使用RPMI嗎？

遵循產品數據表中所述的協議。此外，RPMI 1640具有相對高濃度的磷酸鹽和低鈣離子濃度，這對膜聯蛋白與其目標磷脂酰絲氨酸（PS）的結合產生負面影響。使用膜聯蛋白V測量細胞死亡也可能受到冰上孵育時間，鈣濃度和培養(yǎng)基類型的顯著影響。

pH和染色溫度如何影響膜聯蛋白V-磷脂酰絲氨酸的結合？

膜聯蛋白 - 磷脂酰絲氨酸結合在pH 5.2以下并且在42℃的溫度下延長孵育時丟失。

您的Annexin是如何制作的以及它涵蓋的序列是什么？

它在大腸桿菌中制備，覆蓋人aa Met1-Asp320。

Annexin V是否適合與CytoF®的Maxpar®試劑盒結合使用？

Maxpar®標記試劑盒需要部分還原蛋白質，因此可以通過還原抗體鉸鏈區(qū)的SH基團引入金屬螯合物。人膜??聯蛋白V僅含有一個半胱氨酸，據報道它是化學惰性的。因此，Maxpar®標簽協議不會與膜聯蛋白V工作，除非一個自由的-SH基團可以引入到膜聯蛋白V.有關膜聯蛋白V請咨詢發(fā)表論文像這樣的SH-介導的共軛更多信息一個。

為什么我需要使用Annexin V Binding Buffer？

膜聯蛋白V結合需要溶液中存在鈣。因此，我們提供Annexin V結合緩沖液（目錄號422201），它針對膜聯蛋白V染色的良性能進行了優(yōu)化。