PolyPlus-transfection（PT）是一家位于法國(guó)的生物技術(shù)公司，目前已經(jīng)通過(guò)了ISO9001:2000質(zhì)量體系認(rèn)證。該公司擁有十幾年的的轉(zhuǎn)染試劑研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了一系列的轉(zhuǎn)染試劑，如：基因的體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)染試劑、寡核苷酸轉(zhuǎn)染試劑和siRNA轉(zhuǎn)染試劑等，可以根據(jù)不同的需要獲得穩(wěn)定或瞬時(shí)的轉(zhuǎn)染效果
| 試劑 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物生產(chǎn) |
| 細(xì)胞類型 | 懸浮液CHO，HEK-293及其衍生物 |
| 轉(zhuǎn)染數(shù) | 1毫升FectoPRO的®足以轉(zhuǎn)染800毫升到1升以上的細(xì)胞培養(yǎng)的 |
| 存儲(chǔ) | 5°C±3°C，適當(dāng)存放可穩(wěn)定1-2年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和基因表達(dá)獲得的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
FectoPRO®轉(zhuǎn)染試劑盒專門設(shè)計(jì)用于使用低DNA量（<1 µg / ml細(xì)胞培養(yǎng)物）在各種無(wú)血清培養(yǎng)基中的CHO和HEK-293懸浮細(xì)胞中增強(qiáng)瞬時(shí)基因表達(dá)（TGE）。
FectoPRO®介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染過(guò)程可輕松擴(kuò)展至幾毫升到幾升的細(xì)胞培養(yǎng)，確保強(qiáng)大的可重復(fù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)。更高的生產(chǎn)率和對(duì)DNA的低要求使FectoPRO®成為生物生產(chǎn)過(guò)程中具有成本效益的解決方案。
訂購(gòu)信息：
| Product | Reference Number | Transfection Reagent | Expression Booster | Expression Medium |
|---|---|---|---|---|
| FectoPRO® Reagent | 116-001 | 1 ml | 1 ml | - |
| FectoPRO® Reagent | 116-010 | 10 ml | 10 ml | - |
| FectoPRO® Reagent | 116-040 | 4 x 10 ml | 4 x 10 ml | - |
| FectoCHO® CD Medium | 716-01L | - | - | 1 L |
| FectoCHO® CD Medium | 716-06L | - | - | 6 x 1 L |
| FectoCHO® Expression System | 716-01LKIT | 1 ml | 1 ml | 1 L |
| FectoCHO® Expression System | 716-06LKIT | 5 x 1 mL | 5 x 1 mL | 6 x 1 L |
FectoPRO ®使驚人的高蛋白質(zhì)和抗體的產(chǎn)率在兩個(gè)CHO和HEK-293細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)的（圖1）。
圖1 FectoPRO ®給出了在懸浮的CHO細(xì)胞驚人抗體生產(chǎn)產(chǎn)量。將細(xì)胞以1×106細(xì)胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達(dá)培養(yǎng)基中接種，并用FectoPRO染®（0.8微克DNA / ml）或的FreeStyle™MAX試劑（1.25微克DNA / ml）的下列推薦的方案針對(duì)各個(gè)試劑。重組小鼠IgG產(chǎn)率，使用蛋白G的生物傳感器（福特生物轉(zhuǎn)染后1?6天測(cè)定®八位字節(jié)RED96系統(tǒng)）。FreeStyle™是Life Technologies™Corporation的商標(biāo)。數(shù)據(jù)由ProteoGenix SAS（法國(guó)）友善提供。
了解我們的套件致力于CHO細(xì)胞：FECTOCHO ®表達(dá)系統(tǒng)
FectoPRO ®很大程度上優(yōu)于其它轉(zhuǎn)染試劑如線性PEI在生物生產(chǎn)過(guò)程中常用的轉(zhuǎn)染效率（圖2）而言，導(dǎo)致優(yōu)異的蛋白質(zhì)生產(chǎn)產(chǎn)率（圖3）。
圖2 FectoPRO ®給出了在懸浮的CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率高。的FreeStyle™CHO-S細(xì)胞以1×10接種6個(gè)細(xì)胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達(dá)培養(yǎng)基中，并用FectoPRO轉(zhuǎn)染® + FectoPRO ®使用0.4微克/毫升和1.25微克/毫升的助推器或的FreeStyle™MAX試劑表達(dá)GFP的質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，使用熒光顯微術(shù)測(cè)定GFP表達(dá)。
圖3 FectoPRO ®給出在懸浮液中的CHO和HEK-293細(xì)胞優(yōu)于蛋白質(zhì)生產(chǎn)的產(chǎn)率。的FreeStyle™CHO-S和HEK-293F細(xì)胞以1×10接種6個(gè)細(xì)胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO或293表達(dá)培養(yǎng)基并用FectoPRO轉(zhuǎn)染® + FectoPRO ®助推器（0.4微克DNA /毫升），自由式™ MAX試劑（1.25微克DNA / ml）或PEIpro ®（1個(gè)微克DNA /毫升）以下推薦的協(xié)議用于相應(yīng)的試劑。在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)（CHO細(xì)胞）和120小時(shí)（HEK-293細(xì)胞），通過(guò)蛋白G親和定量（HPLC）和Western Blot測(cè)定IgG3-Fc（34kDa）的產(chǎn)生。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)于純化的IgG3-Fc（34 kDa）。
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高質(zhì)量質(zhì)粒DNA的制備可能非常昂貴，尤其是在大量DNA大量生產(chǎn)大量蛋白質(zhì)需要大量質(zhì)粒的情況下。FectoPRO ®節(jié)省40?60％的DNA成本通過(guò)使用0.4至0.6微克DNA / 10 6個(gè)細(xì)胞/ ml的細(xì)胞培養(yǎng)物; 因此，使該套件成為生物生產(chǎn)過(guò)程中可承受且經(jīng)濟(jì)的解決方案。
表1 DNA的量和試劑（FectoPRO的體積®和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手）根據(jù)生產(chǎn)商的建議轉(zhuǎn)染。
蛋白質(zhì)生產(chǎn)過(guò)程的持續(xù)時(shí)間在過(guò)去幾年中有所增加，現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質(zhì)生產(chǎn)過(guò)程會(huì)持續(xù)1-2周，以獲得宜量的蛋白質(zhì)生產(chǎn)。FectoPRO ®已經(jīng)發(fā)展到保證持續(xù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)在幾天內(nèi)，同時(shí)保持較高的細(xì)胞活力，可以長(zhǎng)期保存蛋白生產(chǎn)（圖4）。
圖4 FectoPRO ®給出了在懸浮細(xì)胞持續(xù)蛋白質(zhì)生產(chǎn)。的FreeStyle™HEK-293F細(xì)胞以1×10 6個(gè)細(xì)胞/ ml的30毫升的FreeStyle™293表達(dá)培養(yǎng)基的接種，并用FectoPRO轉(zhuǎn)染® + FectoPRO ®按照標(biāo)準(zhǔn)方案助推器（0.5微克DNA /毫升）中。在不同的時(shí)間點(diǎn)后，通過(guò)蛋白G親和定量（HPLC）測(cè)定IgG3-Fc的產(chǎn)生。FreeStyle™CHO-S可獲得類似的結(jié)果（數(shù)據(jù)未顯示）。
強(qiáng)大的協(xié)議可輕松適應(yīng)各種培養(yǎng)皿，從而簡(jiǎn)化您的生物生產(chǎn)過(guò)程。FectoPRO ®介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，可以線性地從30毫升放大到升細(xì)胞培養(yǎng)物的無(wú)協(xié)議適配（圖5）。
圖5 FectoPRO ®是在CHO細(xì)胞中易于擴(kuò)展和重現(xiàn)的。的FreeStyle™CHO-S細(xì)胞以1×10接種6個(gè)細(xì)胞/ ml在30毫升100毫升300毫升或1升的FreeStyle™CHO表達(dá)培養(yǎng)基中，并用FectoPRO轉(zhuǎn)染® + FectoPRO ®助推器（0.5微克DNA / ml）的。在第1至6天，使用臺(tái)盼藍(lán)排除法（A）測(cè)定細(xì)胞活力，并通過(guò)蛋白G親和定量（HPLC）（B）和Western Blot（C）測(cè)定IgG3-Fc的產(chǎn)生。標(biāo)準(zhǔn)品（C）對(duì)應(yīng)于純化的IgG3-Fc（34 kDa）。
FectoPRO ®制造和使用配制高度控制生產(chǎn)過(guò)程。這樣可確保實(shí)驗(yàn)之間的結(jié)果均具有高度可重復(fù)性。此外，為了滿足當(dāng)前的管理指南，F(xiàn)ectoPRO ®使用釋放先進(jìn)的質(zhì)量控制包括用于蛋白質(zhì)生產(chǎn)率的規(guī)范，保證優(yōu)良批與批之間的一致性（圖6）。
圖6. FectoPRO ®提供優(yōu)異的批與批的重現(xiàn)。懸浮CHO細(xì)胞以1×10接種6個(gè)細(xì)胞/ ml在30ml CHO培養(yǎng)基中，并使用3個(gè)不同批次FectoPRO的轉(zhuǎn)染®（CCIII 078，CCIII 104或CCIII 106）按照標(biāo)準(zhǔn)方案。轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，通過(guò)蛋白G親和力定量測(cè)定IgG3-Fc的產(chǎn)生。在懸浮的HEK-293細(xì)胞上獲得了相似的結(jié)果（數(shù)據(jù)未顯示）。
不像其它可商購(gòu)的試劑，F(xiàn)ectoPRO ®轉(zhuǎn)染試劑盒是適合于CHO和HEK-293細(xì)胞（圖2和3）。該試劑與各種培養(yǎng)基配方兼容; 因此，實(shí)驗(yàn)室的實(shí)施非常簡(jiǎn)單明了（圖7，表2）。
圖7 FectoPRO ®給出了在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的懸浮的CHO細(xì)胞優(yōu)于蛋白質(zhì)生產(chǎn)的產(chǎn)率。CHO細(xì)胞以1×10接種6個(gè)細(xì)胞/ ml的30ml的FreeStyle™CHO表達(dá)培養(yǎng)基中，CD CHO培養(yǎng)基或Pro-CHO™4培養(yǎng)基并用FectoPRO轉(zhuǎn)染® + FectoPRO ®助推器或的FreeStyle™MAX試劑以下對(duì)推薦的方案各自的試劑。轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，通過(guò)蛋白G親和定量（HPLC）測(cè)定IgG3-Fc的產(chǎn)生。
使用FectoPRO表2蛋白質(zhì)產(chǎn)量®在不同培養(yǎng)基中的CHO細(xì)胞。
使用FectoPRO表3.蛋白質(zhì)產(chǎn)量®在不同培養(yǎng)基中于HEK-293細(xì)胞。
發(fā)現(xiàn)我們的套件致力于CHO細(xì)胞：FECTOCHO ®表達(dá)系統(tǒng)
自由式TM，CD FortiCHO TM，CD的OptiCHO TM，Expi293 TM，ExpiCHO TM和CD293是Gibco公司的商標(biāo)®。
Pro-CHO TM，PowerCHO TM和Pro293 TM是Lonza TM Group的商標(biāo)。
HyClone TM，HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM的商標(biāo)。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標(biāo)TM。
FectoPRO ®也非常適合病毒生產(chǎn)。
