bmgrp BI-20022說(shuō)明書
MDA-oxLDL ELISA | BI-20022
分析特征
方法
夾心ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分離試紙
樣品類型
血清，EDTA血漿，肝素血漿，檸檬酸鹽血漿
樣品量
20 µl /孔
測(cè)定時(shí)間
90分鐘/ 90分鐘/ 30分鐘
靈敏度
0.05微克/毫升
標(biāo)準(zhǔn)范圍
0 – 10 µg / ml
特異性
人MDA-oxLDL加合物
中間運(yùn)行（n = 4）：≤7％CV
批量分析（n = 3）：≤8％CV
采用
僅供研究使用。
MDA oxLDL ELISA試劑盒是一種4小時(shí)，96孔夾心ELISA，用于定量測(cè)定人血清和血漿（EDTA，肝素，檸檬酸鹽）樣品中的MDA-oxLDL加合物。oxldl分析采用基于人血清的標(biāo)準(zhǔn)品，以確保對(duì)生物學(xué)上可靠的數(shù)據(jù)進(jìn)行測(cè)量。
MDA-oxLDL ELISA試劑盒是一種夾心酶免疫測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清和血漿（EDTA，肝素，檸檬酸鹽）樣品中的人MDA-oxLDL加合物。
下圖說(shuō)明了MDA-oxLDL夾心ELISA的原理：
捕獲抗體： 小鼠抗人MDA-oxLDL 單克隆抗體
檢測(cè)抗體：小鼠抗人MDA-oxLDL單克隆抗體，HRP標(biāo)記
靶抗原： MDA-oxLDL
一步，將測(cè)定緩沖液和標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品移液到微量滴定條的孔中，這些孔預(yù)先用單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL抗體包被。存在于標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品中的MDA-oxLDL被孔中的預(yù)包被抗體捕獲。在洗滌步驟中，去除所有非特異性未結(jié)合的材料。在第二步中，將綴合物（單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL-HRP）吸取到孔中，并形成與MDA-oxLDL夾在板上的夾心抗體的三明治。在另一個(gè)洗滌步驟之后，將底物（TMB，四甲基聯(lián)苯胺）吸移到孔中。底物的酶催化顏色變化與MDA-oxLDL的量成正比。使用標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板讀數(shù)器可以檢測(cè)到這種顏色變化。使用從標(biāo)準(zhǔn)品獲得的值，生成吸光度（光密度，在450 nm處的OD）與標(biāo)準(zhǔn)濃度的劑量響應(yīng)曲線。直接從劑量響應(yīng)曲線確定樣品中MDA-oxLDL的濃度。
下圖顯示了人oxldl ELISA試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線。
內(nèi)容 | 描述 | 數(shù)量 |
盤子 | 小鼠單克隆抗人MDA-oxLDL抗體預(yù)包被的微量滴定條，位于條帶支架中，包裝在帶干燥劑的鋁袋中 | 12 x 8測(cè)試 |
洗車場(chǎng) | 濃縮洗滌緩沖液20倍，自然蓋 | 1 x 50毫升 |
ASYBUF | 分析緩沖液，紅色蓋帽，準(zhǔn)備使用 | 1 x 13毫升 |
性病 | 標(biāo)準(zhǔn)1-6（0; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10μg/ ml），人血清中的MDA-oxLDL，白色蓋，凍干 | 6瓶 |
CTRL鍵 | 對(duì)照，白帽子，凍干的，準(zhǔn)確的濃度，見(jiàn)標(biāo)簽 | 1個(gè)小瓶 |
康杰 | 偶聯(lián)物（小鼠抗人MDA-oxLDL單克隆抗體-HRP），琥珀色，準(zhǔn)備使用 | 1 x 13毫升 |
潛艇 | 基材（TMB解決方案），藍(lán)蓋，可以使用 | 1 x 13毫升 |
停 | 停止溶液，蓋上白帽，準(zhǔn)備使用 | 1 x 7毫升 |
儲(chǔ)存說(shuō)明： MDA-oxLDL ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C穩(wěn)定，直到每種試劑標(biāo)簽上注明的有效期。
使用說(shuō)明
血清，EDTA血漿，肝素血漿，檸檬酸鹽血漿適用于該oxldl ELISA試劑盒。研究期間請(qǐng)勿更改樣品類型。我們建議對(duì)所有樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般準(zhǔn)則。
使用EDTA，肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑，在標(biāo)準(zhǔn)化血清分離管（SST）或標(biāo)準(zhǔn)化血液采集管中收集靜脈血樣。對(duì)于血清樣品，讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說(shuō)明離心分離。立即測(cè)定采集的樣品，或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。樣品可以經(jīng)歷至少四個(gè)凍融循環(huán)。
1。 | 使WASHBUF濃縮液達(dá)到室溫。緩沖液濃縮物中的晶體將在室溫（18-26°C）下溶解。 |
2。 | 將WASHBUF濃縮液按1:20的比例稀釋，例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸餾水或去離子水。進(jìn)行測(cè)定時(shí)僅使用稀釋的WASHBUF。 |
稀釋的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。
1。 | 吸取150 µl蒸餾水或去離子水到每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（STD）和對(duì)照（CTRL）小瓶中。準(zhǔn)確的濃度印在每個(gè)樣品瓶的標(biāo)簽上。 |
2。 | 在室溫（18-26°C）下放置15分鐘。輕輕渦旋。 |
重構(gòu)的STD和CTRL在-25°C或更低的溫度下穩(wěn)定，直到標(biāo)簽上標(biāo)明的失效日期為止。STD和CTRL在四個(gè)凍融循環(huán)中保持穩(wěn)定。
將樣品置于室溫并輕輕混合樣品，以確保樣品均勻。我們建議對(duì)所有樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。
OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍的高點(diǎn)的樣品可以稀釋STD1（標(biāo)準(zhǔn)品1）或oxLDL陰性人類血清。建議稀釋度高為1:10。
在開(kāi)始測(cè)定之前，請(qǐng)閱讀整個(gè)方案。
1。 | 使樣品和試劑達(dá)到室溫（18-26°C）。 |
2。 | 在協(xié)議表上標(biāo)記STD / CTRL / SAMPLE（標(biāo)準(zhǔn)/對(duì)照/樣品）的位置。 |
3。 | 從鋁袋中取出微量滴定條。將未使用的干燥劑帶在4°C的鋁袋中存放。膠條在標(biāo)簽上標(biāo)明的有效期限之前都是穩(wěn)定的。 |
4。 | 向每個(gè)孔中加入100μlASYBUF（測(cè)定緩沖液）。 |
5， | 一式兩份加入20μlSTD / CTRL / SAMPLE到各自的孔中，輕輕旋轉(zhuǎn)。 |
6。 | 蓋緊條帶，在室溫（18-26°C）下孵育90分鐘。 |
7。 | 用300μl稀釋的WASHBUF（洗滌緩沖液）吸取并洗滌孔5次。用力將紙巾用紙巾輕輕拍打以取出剩余的WASHBUF。 |
8。 | 向每個(gè)孔中加入100μlCONJ（結(jié)合物）。 |
9。 | 蓋緊條帶，在室溫（18-26°C）下孵育90分鐘。 |
10。 | 用300μl稀釋的WASHBUF抽吸并洗孔5次。用力在一塊紙巾上用力敲打盤子，以去除剩余的WASHBUF。 |
11。 | 在每個(gè)孔中加入100μlSUB（底物）。 |
12 | 在黑暗中于室溫（18-26°C）孵育30分鐘。 |
13 | 向每個(gè)孔中添加50μlSTOP（終止溶液），輕輕旋轉(zhuǎn)。 |
14。 | 如果可用，立即在參考630 nm的450 nm處測(cè)量吸光度。 |
使用450 nm波長(zhǎng)（參考波長(zhǎng)630 nm）在讀板器上讀取所有孔的光密度（OD）。使用能夠生成四參數(shù)對(duì)數(shù)（4-PL）擬合的市售軟件從標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度讀數(shù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。或者，將標(biāo)樣在x軸上的濃度相對(duì)于每種標(biāo)樣在y軸上的平均吸光度作圖，并通過(guò)圖中的點(diǎn)繪制擬合曲線。除4-PL以外的曲線擬合算法尚未得到驗(yàn)證，用戶需要對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。
計(jì)算樣品的終濃度時(shí)，必須考慮各自的稀釋系數(shù)。
套件隨附的質(zhì)量控制（QC）協(xié)議顯示了生產(chǎn)日期每個(gè)批次終版本QC的結(jié)果。客戶獲得的OD數(shù)據(jù)可能會(huì)因各種影響和/或由于保質(zhì)期內(nèi)信號(hào)強(qiáng)度的正常下降而有所不同。但是，只要濃度高的STD的OD為1.0或更高且CTRL的值在范圍內(nèi)（目標(biāo)范圍，請(qǐng)參見(jiàn)標(biāo)簽），這就不會(huì)影響結(jié)果的有效性。
背景與治療領(lǐng)域
氧化的低密度脂蛋白（oxLDLs）在動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈疾病的進(jìn)展中起重要作用。低密度脂蛋白（LDL）是血漿膽固醇的主要載體，由疏水性核心以及極性脂質(zhì)和載脂蛋白B（ApoB）的表面單層組成。氧化應(yīng)激和隨后形成的自由基導(dǎo)致ApoB的過(guò)氧化。丙二醛（MDA）已被確定為L(zhǎng)DL的主要脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物之一，因此在LDL氧化中起著重要作用。
Biomedica MDA oxLDL ELISA特異性檢測(cè)人血清和血漿中MDA修飾的ApoB。
心血管疾病
