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            利用Transcreener CD73檢測發(fā)現(xiàn)新型抑制劑

             更新時間:2020-12-29 點擊量:1827

             

             

            bellbrooklabs利用Transcreener CD73檢測發(fā)現(xiàn)新型抑制劑

            Transcreener CD73檢測可測量由ecto-5'-核苷酸酶(也稱為5'-核苷酸酶,NT5E,分化簇73或CD73)產(chǎn)生的腺苷(ADO)。通過測量ADO的產(chǎn)量,研究人員可以有效地確定該酶的活性。該測定法為篩選CD73調(diào)節(jié)劑的整個化合物文庫提供了強大的工具,以幫助尋找疾病的新療法,例如癌癥。

            該測定法使用偶聯(lián)酶,該偶聯(lián)酶使用CD73產(chǎn)生的ADO產(chǎn)生產(chǎn)物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析組件來測量ADP。該試劑盒配有測量活性所需的所有檢測試劑。抑制劑篩選測定試劑盒中不包括CD73酶。

            CD73是嘌呤能信號傳導(dǎo)的重要信使

            外源核苷酸是與細(xì)胞膜結(jié)合的酶,具有外部定向的活性位點,可將核苷酸代謝為核苷,對于維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。CD39將ATP和ADP水解為AMP。CD73將AMP進(jìn)一步加工成腺苷,從而對許多疾病產(chǎn)生重大影響。近的研究表明,腺苷在腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制中起著關(guān)鍵作用,而外切核苷酸酶正成為有希望的免疫腫瘤學(xué)靶標(biāo)。了解更多有關(guān)使用TranscreenerAMP²測定法靶向CD39的信息。

            嘌呤能信號

            檢測腺苷以測量CD73的酶活性

             
            Transcreener CD73檢測示意圖
             
             

             

             

             

            查看預(yù)先錄制的網(wǎng)絡(luò)研討會-Transcreener CD73分析:利用核苷酸檢測來測量腺苷

            這次演講的重點 是在基礎(chǔ)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中使用Transcreener®ADP 2分析法測量腺苷。涵蓋的主題包括:

            • 開發(fā)用于測量CD73酶活性的偶聯(lián)測定
            • 建立高通量篩選條件
            • 設(shè)置屏幕
            • 運行劑量響應(yīng)曲線,重點是數(shù)據(jù)分析
             

            應(yīng)用領(lǐng)域

            • 測量CD73的酶活性
            • 篩選CD73抑制劑的復(fù)合文庫
            • 量化抑制劑效能(IC 50)
            • 抑制劑選擇性分析

            特征

            • 未標(biāo)記腺苷的檢測
            • 易于使用,同質(zhì),一步式
            • 初始速度條件下的穩(wěn)健分析Z'> 0.7
            • 遠(yuǎn)紅外熒光讀數(shù)程度地減少了化合物干擾
            • 一種安全的非放射性方法

            易于使用,混合閱讀,HTS就緒分析

            Transcreener CD73測定法采用易于HTS使用的混合讀取格式。運行您的酶反應(yīng),添加Transcreener試劑,然后閱讀板。該測定與96、384和1536孔格式兼容。

            初始速度下腺苷的檢測

            當(dāng)原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為使用標(biāo)準(zhǔn)曲線生成的腺苷時,該測定法證明了線性。

            人CD73酶滴定

            CD73酶滴定

            線性響應(yīng)

            初始速度下的CD73

            抑制劑篩選和執(zhí)行SAR

            Transcreener Assays設(shè)計用于以高通量格式篩選化合物庫。還可以使用該測定法進(jìn)行隨訪SAR,從而輕松確定抑制劑的效價。

            1600復(fù)合先導(dǎo)篩

            CD73先導(dǎo)屏幕

            使用CD73活性測定法篩選了來自Chembridge多樣性庫的子集。該子集的ah率為0.85%,而穩(wěn)健的Z'為0.81。

            獲取準(zhǔn)確的劑量響應(yīng)測量

            PSB 12379效能CD73

            在存在5 pM CD73的情況下PSB 12379的劑量反應(yīng)曲線。該數(shù)據(jù)說明IC 50為19 nM。

            可靠的分析可產(chǎn)生質(zhì)量數(shù)據(jù)

            使用優(yōu)化的CD73反應(yīng)條件進(jìn)行的Z'測量表明存在可靠的分析方法。如此強大的數(shù)據(jù)對于大尺寸的高通量篩選至關(guān)重要,由于大量樣品難以完成。

            在主要的多模閱讀器上驗證了遠(yuǎn)紅FP讀數(shù)

            供應(yīng)商儀器
            bioteklogoTriStar²SLB 942
            密特拉拉斯LB 943
             
            bioteklogoCytation™5
            Cytation™3
            Cytation™1
            Synergy™H1
            Synergy™2 / H4 / 4
            Synergy™HTX
            Synergy™Neo 2
             
            BMGLABTECH徽標(biāo)POLARstar ®歐米茄
            FLUOSTAR ®歐米茄
            PHERAstar ® FSX
            PHERAstar ®加/ FS
            CLARIOstar ® /加
             
            MDS AT徽標(biāo)分析師® GT / HT
            雙子座® XPS / EM
            的SpectraMax ® M2 / M2e的
            的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3
            的SpectraMax ®范式
             
            珀金埃爾默標(biāo)志的EnVision ® /的EnVision ® XCITE
             
            tecanLogo無限® M1000 / M1000Pro / Safire2™
            無限® M200
            無限® F500
            無限® F200 /超進(jìn)化
            Spark™10M

            包含什么

             
            零件筆記
            ADP²抗體核苷酸ADP特異的抗體。
            ADP追蹤器替換后,可以以FP分析格式讀取熒光的變化。
            腺苷用于啟動CD73酶促反應(yīng)并生成AMP / ADO標(biāo)準(zhǔn)曲線。
            安培AMP用于創(chuàng)建ADO / AMP標(biāo)準(zhǔn)曲線,并用作CD73的底物。
            三磷酸腺苷用作偶聯(lián)酶的底物。
            耦合酶將ADO傳輸?shù)紸DP和AMP,從而允許通過TranscreenerADP²分析組件測量ADP。

            您將需要什么

             
            零件筆記
            CD73酶我們已經(jīng)成功使用了R&D Systems Cat。公司的純化重組CD73酶。#5795-EN。
            酶緩沖液我們已經(jīng)成功使用了pH 7.5的50 mM Tris,5 mM MgCl 2,1%DMSO和0.01%Brij-35緩沖液。
            停止解決方案該測定設(shè)計為以動力學(xué)模式運行。該套件沒有停止解決方案。
            檢測板可以直接通過BellBrook實驗室購買測定板。

             

            FP-需要一個具有非粘合表面的全黑色印版。我們建議使用康寧384孔板Cat。#4514

             

            Transcreener CD73檢測試劑盒

            *對于定制或批量訂單(超過10,000口井),

             
            貨號。產(chǎn)品描述價錢
            3026-1 KTranscreener CD73 FP測定法(1,000測定法,384孔)$ 995
            3026-10KTranscreener CD73 FP測定法(10,000測定法,384孔)$ 5,699

            FP檢測板

             
            貨號。產(chǎn)品描述價錢
            2229康寧384孔黑色檢測板(#4514),3包(1,000多種檢測)$ 45
            2230康寧384孔黑色檢測板(#4514),30包(10,000+檢測)$ 400
             

            CD73檢測服務(wù)

            有興趣推進(jìn)您的程序,但不想內(nèi)部進(jìn)行分析嗎?我們的科學(xué)家可以提供幫助!BellBrook的科學(xué)家將利用其豐富的生物化學(xué)和酶學(xué)專業(yè)知識與您合作,并加快您的CD73程序。

            分析開發(fā)服務(wù)

            潛在客戶發(fā)現(xiàn)服務(wù)包括:

            • 抑制劑篩選–識別或確認(rèn)靶標(biāo)的活性。
            • 抑制劑效能分析–靶標(biāo)和/或相關(guān)蛋白的劑量反應(yīng)??焖買C 50結(jié)果。
            • 停留時間測量–使用“跳躍稀釋”酶法測定k off。
            • 作用機理研究–動力學(xué)分析定義了抑制方式。

             

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