targetingsystems蛋白質(zhì)表達(dá)說明書
使用 Targefect-293F 高效轉(zhuǎn)染 Free style 293 細(xì)胞
獲得高水平蛋白質(zhì)表達(dá)的簡單且經(jīng)濟的解決方案。
Targefect-293F 是一種脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，專為高效轉(zhuǎn)染自由式 293 細(xì)胞和懸浮 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)物而配制。
轉(zhuǎn)染方案
Targefect-293FS 試劑應(yīng)在 -20 o C 下冷凍保存。在使用前將試劑解凍至室溫。使用前將試劑全速渦旋 30 秒 2-3 次。
當(dāng) 293S 細(xì)胞生長到足夠高的密度（50ml 或更多時為 200 萬個細(xì)胞/ml）時，繼續(xù)準(zhǔn)備它們以進行瞬時轉(zhuǎn)染。
取回兩個 125 毫升康寧搖瓶。
添加足夠的細(xì)胞和培養(yǎng)基，以 110 萬個細(xì)胞/毫升的密度獲得 27 毫升的體積。使用來自 Invitrogen 的 Freestyle 293 培養(yǎng)基或來自 Hyclone 的 Transfx-293 培養(yǎng)基。
將燒瓶置于 125rpm 和 8% CO2 的搖床培養(yǎng)箱中。
檢索 GFP DNA 和 Targefect-293FS 試劑。在冰上解凍這兩個組件。一定要劇烈渦旋脂質(zhì) 30-60 秒。
取回兩個 15 毫升錐形管。在每管中加入 1.5ml 來自 Invitrogen 的 OPTI-MEM 培養(yǎng)基。將一個標(biāo)記為 DNA，另一個標(biāo)記為脂質(zhì)。
在 DNA 管中，添加 30ug GFP DNA 并通過輕彈管底部進行混合。如果您不確定 DNA 的無菌性，您可以使用注射器和針頭通過 0.22 微米過濾器對其進行過濾。
在脂質(zhì)管中，加入 30ul 的 Targefect-293FS Reagent 并劇烈渦旋混合物 30-60 秒。
讓 DNA 和脂質(zhì)混合物在室溫下孵育 5 分鐘。
在孵育結(jié)束時，將 DNA 混合物添加到脂質(zhì)混合物中，然后輕彈管底部混合內(nèi)容物。
讓 DNA-脂質(zhì)復(fù)合物在室溫下形成 20 分鐘。
在 20 分鐘結(jié)束時，將 ~3ml 的 DNA-脂質(zhì)混合物添加到兩個 125ml 搖瓶中的一個。標(biāo)記為 GFP 控制。向另一個搖瓶中加入 3ml OPTI-MEM 并標(biāo)記為 Cell Only Control。
每個燒瓶中的最終密度應(yīng)為 ~1x10^6 細(xì)胞/毫升。
約 48 小時后，GFP 對照燒瓶中的細(xì)胞中應(yīng)出現(xiàn)明顯的綠色熒光。5 天后，兩個燒瓶之間應(yīng)該有非常明顯的區(qū)別。
在 5 天結(jié)束時收獲兩個燒瓶。將細(xì)胞降速并保存 sup。儲存在 4 o C 直到需要。
使用上述轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率已達(dá)到 90% 以上（使用 GFP 作為標(biāo)記）。請聯(lián)系技術(shù)支持以獲取更多信息 1-866-620-4018 注意：對于轉(zhuǎn)染 HEK-293 細(xì)胞，我們推薦使用Targefect-293 試劑
訂購信息
• Targefect-293F，目錄 #293F-01，1ml --------------------- -- 170 美元
• Targefect=293F，目錄 #293F-10，10 毫升 --------------------------------- 1250 美元
