assaygenie HUFI07676說明書
貨號：
HUFI07676
該測定法的Genie人類過氧化氫酶ELISA試劑盒可以在下列樣品中測定人類過氧化氫酶：血清，血液，血漿，細胞培養(yǎng)上清液和其他相關的上清液和組織。
我們的人過氧化氫酶 ELISA 試劑盒如何工作？
Assay Genie（酶聯(lián)免疫吸附測定）測定試劑盒設計用于定量測量各種樣品中的分析物。由于當今的科學家需要高影響力期刊的高質(zhì)量一致數(shù)據(jù)，因此 Assay Genie 開發(fā)了我們靈敏、快速和可靠的 ELISA 試劑盒檢測系列，以滿足并超越這些需求。我們的檢測試劑盒使用定量夾心 ELISA 技術，每個試劑盒都帶有預包被在 96 孔微量滴定板上的高度特異性抗體。
在 Assay Genie，我們了解對速度的需求！因此，我們開發(fā)了一種超快速方案，這意味著您可以快速獲得結果。因此，一旦您準備好并鋪板了樣品、空白和標準品，您只需使用高度特異性的生物素偶聯(lián)一抗和偶聯(lián)辣根過氧化物酶 (HRP) 的親和素進行孵育，然后孵育適當?shù)臅r間。根據(jù)協(xié)議洗滌板并添加 TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）溶液后，由于 HRP 催化的酶促反應，應檢測到藍色的出現(xiàn)。下一步是添加終止溶液，終止 HRP 反應，藍色變?yōu)辄S色，信號強度在 450nm 讀板器上測量。
| 產(chǎn)品代碼 | HUFI07676 | ||||||||||||||||
| 別名 | CAT ELISA 試劑盒、Cas1 ELISA 試劑盒、Cs-1 ELISA 試劑盒、過氧化氫酶 ELISA 試劑盒 | ||||||||||||||||
| 檢測方法 | 夾心ELISA，雙抗體 | ||||||||||||||||
| 應用 | 該免疫測定試劑盒允許體外定量測定血清血漿和其他生物體液中的人 CAT（過氧化氫酶）濃度。 | ||||||||||||||||
| 尺寸 | 96T | ||||||||||||||||
| 范圍 | 15.625-1000pg/ml | ||||||||||||||||
| 靈敏度 | < 9.375pg/ml | ||||||||||||||||
| 貯存 | 4'C 6 個月 | ||||||||||||||||
| 恢復 | 下面列出的基質(zhì)中加入了一定水平的人 CAT（過氧化氫酶），通過將測量值與樣品中人 CAT（過氧化氫酶）的預期量進行比較來計算回收率。
| ||||||||||||||||
| 線性度 | 該試劑盒的線性通過測試添加適當濃度的人 CAT（過氧化氫酶）及其系列稀釋液的樣品進行測定。結果通過計算濃度與預期濃度的百分比來證明。
| ||||||||||||||||
| 簡歷（％） | 批內(nèi)：CV<8% | ||||||||||||||||
| 筆記 | 僅供研究使用 |
以下方案是使用生物素化檢測抗體和鏈霉親和素-HRP 的人 CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒的示例方案。夾心 ELISA 試劑盒允許通過使用已知分析物濃度作為標準并繪制已知濃度與已知標準濃度的吸光度來檢測和量化樣品中的分析物。這使研究人員可以計算樣品中存在的人類 CAT（過氧化氫酶）抗體的數(shù)量。
在加入孔之前，在 37°C 下平衡 SABC 工作溶液和 TMB 底物至少 30 分鐘。稀釋樣品和試劑時，必須*混合均勻。建議為每個測試繪制標準曲線。
| 1. | 在預涂板上分別設置標準、測試樣品和控制（零）孔，然后記錄它們的位置。建議重復測量每個標準和樣品。在添加標準、樣品和對照（零）孔之前洗板 2 次！ |
| 2. | 將 0.1ml 標準溶液分裝到標準孔中。 |
| 3. | 將 0.1 ml 樣品/標準稀釋緩沖液加入對照（零）孔中。 |
| 4. | 將 0.1 ml 適當稀釋的樣品（人血清、血漿、組織勻漿和其他生物體液）加入測試樣品孔中。 |
| 5. | 用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 90 分鐘。 |
| 6. | 取下蓋子并丟棄板內(nèi)容物，將板拍在吸水濾紙或其他吸水材料上。任何時候都不要讓孔*干燥。洗板 X2。 |
| 7. | 向上述孔（標準孔、測試樣品孔和零孔）中加入 0.1 ml 生物素檢測抗體工作液。在不接觸側壁的情況下在每個孔的底部添加溶液。 |
| 8. | 用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 60 分鐘。 |
| 9. | 取下蓋子，用洗滌緩沖液洗滌板 3 次。讓洗滌緩沖液在每次洗滌之間在井中休息 1 分鐘。 |
| 10. | 每孔加入 0.1 ml SABC 工作液，蓋上板，37°C 孵育 30 分鐘。 |
| 11. | 取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板 5 次，每次讓洗滌緩沖液在孔中停留 1-2 分鐘。 |
| 12. | 向每個孔中加入 90 µl TMB 底物，蓋上板并在 37°C 下避光孵育 10-20 分鐘。（注：此孵育時間僅供參考，最佳時間由最終用戶決定。）在前 3-4 孔（標準溶液濃度最高）中可以看到藍色陰影，其他孔顯示沒有明顯的顏色。 |
| 13. | 在每個孔中加入 50 µl 停止溶液并充分混合。顏色立即變?yōu)辄S色。 |
| 14. | 添加終止溶液后，立即在酶標儀中讀取 450 nm 處的 OD 吸光度。 |
人 CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒組件 | 96 檢測 | 貯存 |
| ELISA 微孔板（可拆卸） | 8×12 條 | 4°C 6 個月 |
| 凍干標準品 | 2 | 4°C/-20°C |
| 樣品/標準稀釋緩沖液 | 20毫升 | 4°C |
| 生物素標記抗體（濃縮） | 120ul | 4°C（避光） |
| 抗體稀釋緩沖液 | 10毫升 | 4°C |
| HRP-鏈霉親和素偶聯(lián)物(SABC) | 120ul | 4°C（避光） |
| SABC 稀釋緩沖液 | 10毫升 | 4°C |
| TMB底物 | 10毫升 | 4°C（避光） |
| 停止解決方案 | 10毫升 | 4°C |
| 洗滌緩沖液（25X） | 30毫升 | 4°C |
| 封板機 | 5 | —— |
Assay Genie Human CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒需要其他設備和材料來進行檢測。請參閱下面的列表了解更多詳情。
帶 450 nm 波長濾光片的酶標儀
多通道移液器、移液器、微量離心管和一次性移液器吸頭
孵化器
去離子水或蒸餾水
吸水紙
緩沖水庫
在進行 ELISA 檢測時，重要的是準備您的樣品以達到可能的最佳結果。下面我們列出了為不同樣品類型準備樣品的程序。
| 樣品類型 | 協(xié)議 |
血清 | 如果使用血清分離管，讓樣品在室溫下凝結 30 分鐘。以 1,000x g 離心 10 分鐘。立即收集血清部分并進行檢測或等分并將樣品儲存在 -80°C。避免多次凍融循環(huán)。 如果不使用血清分離管，讓樣品在 2-8°C 下凝結過夜。以 1,000x g 離心 10 分鐘。立即取出血清并進行檢測，或將樣品等分并儲存在 -80°C 下。避免多次凍融循環(huán)。 |
等離子體 | 使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。在收集后 30 分鐘內(nèi)，將樣品在 4°C 下以 1000 × g 離心 15 分鐘。立即收集血漿部分并進行檢測或等分并將樣品儲存在 -80°C。避免多次凍融循環(huán)。注意：過度溶血的樣品不適合與該試劑盒一起使用。 |
尿液和腦脊液 | 在無菌容器中收集尿液（中流），以 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘。立即取出上清液并進行檢測。如果檢測到任何沉淀，請重復離心步驟。類似的協(xié)議可用于腦脊液。 |
細胞培養(yǎng)上清 | 用移液管收集細胞培養(yǎng)基，然后在 4°C 下以 1500 rpm 離心 20 分鐘。立即收集澄清的上清液并進行檢測。 |
細胞裂解液 | 在裂解緩沖液中溶解細胞，并在冰上靜置 30 分鐘。以 14,000 xg 離心管 5 分鐘以去除不溶性物質(zhì)。將上清液分裝到新管中并丟棄剩余的全細胞提取物。使用總蛋白質(zhì)測定法量化總蛋白質(zhì)濃度。立即測定或分裝并儲存在 ≤ -20 °C。 |
組織勻漿 | 組織勻漿的制備將因組織類型而異。用 1X PBS 沖洗組織以去除多余的血液并在 20ml 1X PBS（包括蛋白酶抑制劑）中勻漿，并在 ≤ -20°C 下儲存過夜。打破細胞膜需要兩個凍融循環(huán)。為了進一步破壞細胞膜，您可以對樣品進行超聲處理。以 5000xg 離心勻漿 5 分鐘。立即取出上清液并進行檢測，或等分并儲存在 -20°C 或 -80°C。 |
組織裂解物 | 用 PBS 沖洗組織，切成 1-2 毫米的碎片，并用 PBS 中的組織勻漿器勻漿。加入等體積的含有蛋白酶抑制劑的 RIPA 緩沖液，并在室溫下輕輕攪拌裂解組織 30 分鐘。離心去除碎屑。使用總蛋白質(zhì)測定法量化總蛋白質(zhì)濃度。立即測定或分裝并儲存在 ≤ -20 °C。 |
母乳 | 收集牛奶樣品并在 4°C 下以 10,000 xg 離心 60 分鐘。分裝上清液并進行測定。如需長期使用，請將樣品儲存在 -80°C。盡量減少冷凍/解凍周期。 |
| UniProt 蛋白質(zhì)功能： | 過氧化氫酶：幾乎存在于所有有氧呼吸的生物體中，用于保護細胞免受過氧化氫的毒性作用。促進細胞的生長，包括 T 細胞、B 細胞、髓系白血病細胞、黑色素瘤細胞、肥大細胞瘤細胞以及正常和轉化的成纖維細胞。同源四聚體。屬于過氧化氫酶家族。 |
| UniProt 蛋白質(zhì)詳細信息： | 蛋白質(zhì)類型：氨基酸代謝 - 色氨酸；內(nèi)質(zhì)網(wǎng); EC 1.11.1.6；細胞凋亡；能量代謝 - 甲烷；線粒體; 水解酶；氧化還原酶 人類直系同源物的染色體位置： 11p13 細胞成分：過氧化物酶體膜；高爾基體; 過氧化物酶體基質(zhì)；粘著斑；細胞內(nèi)膜結合細胞器；膜; 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；溶酶體；質(zhì)膜; 線粒體膜間隙；過氧化物酶體；胞質(zhì)溶膠 分子功能：抗氧化活性；氧化還原酶活性，作用于作為受體的過氧化物；酶結合；蛋白質(zhì)同二聚化活性；過氧化氫酶活性；金屬離子結合；血紅素結合；NADP 綁定；氨?；富钚?；受體結合 生物過程：膽固醇代謝過程；血紅蛋白代謝過程；核堿基、核苷和核苷酸代謝過程；嘌呤堿代謝過程；NF-κB 轉錄因子的激活；蛋白質(zhì)同源四聚化；成骨細胞分化；正調(diào)控磷酸肌醇 3-激酶級聯(lián)反應；對維生素 E 的反應；對活性氧的反應；三酰甘油代謝過程；對高氧的反應；紫外線防護；過氧化氫分解代謝過程；抑制 NF-κB 轉錄因子；輸尿管芽發(fā)育；細胞分裂的正調(diào)控；對缺氧的反應；有氧呼吸; 嘌呤核苷酸分解代謝過程；蛋白質(zhì)四聚化；細胞凋亡的負調(diào)控；老化 疾?。?/span>急性貧血 |
| NCBI總結： | 該基因編碼過氧化氫酶，這是人體抵御氧化應激的關鍵抗氧化酶。過氧化氫酶是一種血紅素酶，存在于幾乎所有需氧細胞的過氧化物酶體中。過氧化氫酶將活性氧類過氧化氫轉化為水和氧氣，從而減輕過氧化氫的毒性作用。假設氧化應激在許多慢性或遲發(fā)性疾病的發(fā)展中起作用，例如糖尿病、哮喘、阿爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎和癌癥。該基因的多態(tài)性與過氧化氫酶活性降低有關，但迄今為止，無過氧化氫血癥是已知由該基因引起的疾病。[由 RefSeq 提供，2009 年 10 月] |
| UniProt 代碼： | P04040 |
| NCBI GenInfo 標識符： | 115702 |
| NCBI 基因 ID： | 847 |
| NCBI 加入： | P04040.3 |
| UniProt 相關加入： | P04040 |
| 分子量： | |
| NCBI 全名： | 過氧化氫酶 |
| NCBI 同義詞全名： | 過氧化氫酶 |
| NCBI *符號： | 貓 |
| NCBI 蛋白質(zhì)信息： | 過氧化氫酶 |
| UniProt 蛋白名稱： | 過氧化氫酶 |
| 蛋白質(zhì)家族： | 過氧化氫酶 |
| UniProt 基因名稱： | 貓 |
| UniProt 條目名稱： | CATA_HUMAN |
