aatbio Covidyte™ TF670說明書

　更新時間：2022-01-14　點擊量：1400

aatbio Covidyte™ TF670說明書

Covidyte™ TF670

概述

另請參閱：酶、蛋白酶、生物偶聯(lián)、冠狀病毒 (SARS-CoV-2)、染料與肽偶聯(lián)、F?rster 共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET)

分子量	激發(fā)（納米）	發(fā)射（納米）	消光系數(shù)（cm ^-1 M ^-1）	校正因子 (280 nm)
3620.33	649	664	250000	0.027

冠狀病毒 (CoV) 可以感染人類和多種動物，引起廣泛的疾病。2019 年底，一種被稱為嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒 2 (SARS-CoV-2) 的冠狀病毒被確定為導致幾例呼吸系統(tǒng)疾病 (Covid19) 的原因。該病毒在全球范圍內(nèi)迅速傳播。它已經(jīng)感染了超過 100 萬人，Covid19 已造成 7 萬多人死亡（截至 2020 年 4 月 6 日）。目前，沒有任何具體有效的治療 Covid19 的選擇。目前，Covid19的臨床治療主要是對癥聯(lián)合對已上市的抗病藥物如瑞德西韋和抗生素進行再利用來治療繼發(fā)感染。Covidyte™ TF670 是一種包含 14 個氨基酸序列 (KTSAVLQSGFRKME) 的肽底物，可被冠狀病毒蛋白酶切割。dark-FRET 肽在 N 端和 C 端分別含有 Tide Quencher™ 5 (TQ5) 作為猝滅劑和 Tide Fluor™ 5 (TF5) 作為熒光供體，其中 TF5 的熒光在肽段被 TQ5 有效猝滅時完好無損。當肽被冠狀病毒蛋白酶水解時，TF5 片段會產(chǎn)生顯著增強的熒光，因為它的熒光不再被 TQ5 淬滅。TF5的熒光強度可以有效監(jiān)測冠狀病毒蛋白酶的活性。Covidyte™ TF670 是一種強大的高通量篩選工具，用于搜索冠狀病毒蛋白酶的抑制劑。TQ5-TF5 對已被證明是用于開發(fā) FRET 蛋白酶底物的極為有效的 FRET 對。與常用的 EDANS 底物（如 Covidyte™ EN450）相比，TF670 底物具有更強和更長的熒光，較少受有色化合物的干擾，而這些有色化合物通常會導致假陽性命中。

平臺

熒光酶標儀
勵磁	640 納米
排放	680 納米
隔斷	660 納米
推薦板	純黑色

示例協(xié)議

準備解決方案

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在 -20°C。避免重復凍融循環(huán)。

Covidyte™ TF670 原液 (200X)

將 25 µL（對于 cat# 13540）或 250 µL（對于 cat# 13541）DMSO 添加到 Covidyte™ TF670 小瓶中。
注意制作一次性等分試樣并儲存在 -20 °C。

準備工作解決方案

1. Covidyte™ TF670 工作液

在 20 mM Tris 緩沖液 (pH 7.5) 或您選擇的緩沖液中以 1:200 稀釋底物儲備溶液。在 96 孔板中每次測定使用 50 μL 的底物溶液。

2. 冠狀病毒蛋白酶稀釋

根據(jù)需要稀釋冠狀病毒蛋白酶。

示例實驗協(xié)議

一個 96 孔板的樣品協(xié)議

將 50 μL 的每種蛋白酶稀釋液添加到檢測板的各個孔中。
在每個蛋白酶稀釋液中加入 50 μL Covidyte™ TF670 工作溶液。
在 Ex/Em = 640/680 nm（截止 660 nm）處使用熒光讀板器監(jiān)測熒光增加。

對于動力學讀數(shù)：立即開始連續(xù)測量熒光強度，每 5 分鐘記錄一次數(shù)據(jù)，持續(xù) 30-120 分鐘。
對于終點讀數(shù)：在所需溫度下孵育反應 30 至 120 分鐘，避光。然后測量熒光強度。

示例數(shù)據(jù)分析和數(shù)據(jù)

圖 1.蛋白酶在蛋白質(zhì)激活、細胞調(diào)節(jié)和信號傳導以及生成用于蛋白質(zhì)合成或在其他代謝途徑中利用的氨基酸中發(fā)揮重要作用。FRET 蛋白酶底物廣泛用于檢測蛋白酶活性，特別是對于通常需要長肽序列以實現(xiàn)最佳結合的病毒蛋白酶，例如冠狀病毒、HIV 和 HCV 蛋白酶。內(nèi)部猝滅的 FRET 肽底物被蛋白酶消化以產(chǎn)生高熒光肽片段。熒光增加與蛋白酶活性成正比。Tide Quencher™ 染料與我們明亮的 Tide Fluor™ 和 iFluor™ 染料一起被證明是開發(fā) FRET 蛋白酶底物以用于高通量篩選應用的極其有效的淬滅劑。

計算器

普通儲備溶液制備

表 1.將特定質(zhì)量的 Covidyte™ TF670 重構至給定濃度所需的 DMSO 體積。請注意，體積僅用于制備儲備溶液。有關適當?shù)膶嶒?生理緩沖液，請參閱示例實驗協(xié)議。

	0.1毫克	0.5毫克	1毫克	5毫克	10毫克
1毫米	27.622 µL	138.109 µL	276.218 µL	1.381 毫升	2.762 毫升
5毫米	5.524 µL	27.622 µL	55.244 µL	276.218 µL	552.436 µL
10毫米	2.762 µL	13.811 µL	27.622 µL	138.109 µL	276.218 µL

摩爾濃度計算器

輸入任意兩個值（質(zhì)量、體積、濃度）來計算第三個。

圖片

圖 1.蛋白酶在蛋白質(zhì)激活、細胞調(diào)節(jié)和信號傳導以及生成用于蛋白質(zhì)合成或在其他代謝途徑中利用的氨基酸中發(fā)揮重要作用。FRET 蛋白酶底物廣泛用于檢測蛋白酶活性，特別是對于通常需要長肽序列以實現(xiàn)最佳結合的病毒蛋白酶，例如冠狀病毒、HIV 和 HCV 蛋白酶。內(nèi)部猝滅的 FRET 肽底物被蛋白酶消化以產(chǎn)生高熒光肽片段。熒光增加與蛋白酶活性成正比。Tide Quencher™ 染料與我們明亮的 Tide Fluor™ 和 iFluor™ 染料一起被證明是開發(fā) FRET 蛋白酶底物以用于高通量篩選應用的極其有效的淬滅劑。

圖 2. Covidyte™ TF670 的化學結構。

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