jembio Klenow 片段，DNA 聚合酶簡(jiǎn)介
Klenow Fragment
Klenow ，大腸桿菌 DNA 聚合酶 l 酶的大片段，保留聚合酶 l 的聚合酶和校對(duì) 3'->5' 外切核酸酶活性。
描述：缺乏 5'-核酸外切酶活性 (1)。超純重組酶。用于 Sanger 雙脫氧測(cè)序 (2)。適用于第二鏈 cDNA 合成 (3)。用于 3'-末端標(biāo)記和填充 5'-突出粘性末端 (4)。
單位定義：一個(gè)單位是在 37oC 下 30 分鐘內(nèi)將 10 nmoles 的總核苷酸摻入酸不溶形式所需的酶量。
儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存在 –20oC。
儲(chǔ)存緩沖液：50 mM 磷酸鉀 (pH 7.0)、0.25 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。
測(cè)定條件：67 mM 磷酸鉀 (pH 7.4)、6.7 mM MgCl2、1 mM 二硫蘇糖醇、dCTP、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP 各 0.033 mM，以及 4.5 µg 活化 DNA。在 100 µl 反應(yīng)體積中，在 37oC 下孵育 30 分鐘。
質(zhì)量控制：對(duì)所有制劑進(jìn)行污染核酸內(nèi)切酶和 5'-核酸外切酶活性檢測(cè)。通過 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷，典型的制劑純度大于 95%。
