ezbioscience EZB-exo2說明書

Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM) 

產品概述

介紹

EZBioscience®外泌體分離試劑盒（來自NTA/TEM細胞培養(yǎng)基）提供了一種簡單、可靠和快速的方法，用于從細胞培養(yǎng)基、尿液、支氣管肺泡灌洗液（BALF）、腦脊液（CSF）樣品中分離高質量完整的總外泌體，而無需超速離心。

外泌體是含有RNA和蛋白質的小囊泡（30-120nm），由培養(yǎng)物中的各種類型的細胞分泌，并在體液（如血液，唾液，尿液和母乳）中大量存在。據報道，外泌體作為細胞間信使發(fā)揮作用，在特定細胞之間傳遞效應物或信號大分子;然而，它們的形成、貨物的組成以及它們所涉及的生物學途徑尚不清楚。

外泌體分離試劑盒（來自細胞培養(yǎng)基）提供了一種簡單可靠的方法，可以從細胞培養(yǎng)基樣品中濃縮完整的外泌體。通過捆綁水分子，外泌體沉淀試劑迫使溶解性較低的組分（即外泌體）從溶液中取出，從而可以通過短暫且相對低速的離心收集它們。然后通過純化柱（0.22μm）純化重懸的外泌體。

之后，外泌體可用于RNA純化（用于RNA測序、RNA芯片、RT-qPCR）、蛋白質提取、粒度檢測和電子顯微鏡等。

協議

一般準則

a） 為確保分離的外泌體源自目標細胞，請用外泌體耗盡胎牛血清（FBS）或無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，因為正常的FBS含有ji高水平的外泌體，會污染細胞來源的外泌體。如果您無法獲得外泌體耗盡的FBS，某些細胞系可以在沒有FBS的培養(yǎng)基中生長長達12小時。

b） 不建議使用外泌體沉淀試劑 （EPR） 從其他種類的樣品中分離外泌體。如果要從血漿中分離完整的外泌體，請使用全外泌體分離（從血漿中分離）試劑。

準備樣品

1.收獲5~20ml細胞培養(yǎng)基（或尿液，支氣管肺泡灌洗液，腦脊液）。

2.將血漿樣品在3000 × g 在4°C下離心10分鐘以除去細胞和碎片。

3.將含有無細胞培養(yǎng)基的上清液轉移到新管中，而不會干擾沉淀。

分離外泌體

1.將所需體積的無細胞培養(yǎng)基轉移到新管中，并加入1/4體積的外泌體沉淀試劑（EPR）。

文化媒體	試劑
5毫升	1.25毫升
20毫升	5毫升

2.通過渦旋或倒置試管將培養(yǎng)基/試劑混合物充分混合，直到溶液均勻。將樣品在 2 ~ 8°C 下孵育過夜。

3.孵育后，將樣品在4°C下以10000×g離心30分鐘。

4.通過移液小心地吸出上清液并丟棄上清液。外泌體包含在管底部的沉淀中（在大多數情況下不可見）。

重懸外泌體

1.向沉淀中加入1× PBS或類似的緩沖液，上下渦旋或移液以重懸外泌體。

啟動文化媒體卷	重懸體積
1毫升	30微升
10毫升	60微升

2.一旦沉淀重懸，外泌體就可以進行下游分析或通過親和方法進一步純化。