核酸內(nèi)切酶酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）說明書-PROGEN Endonuclease ELISA

核酸內(nèi)切酶水平的快速簡便定量

PROGEN 核酸內(nèi)切酶 ELISA 試劑盒是一種高靈敏度檢測方法，專為體外檢測粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）來源的核酸內(nèi)切酶（包括 DENARASE®）及含 DENARASE® 的樣品而設(shè)計(jì)。

該檢測方法可用于多種工藝來源的樣品，包括腺相關(guān)病毒（AAV）基因治療載體生產(chǎn)過程中的樣品。在 AAV 純化過程中，會(huì)添加核酸酶以降解多余的 DNA 雜質(zhì)。然而，不受控的核酸酶活性可能會(huì)破壞關(guān)鍵成分（如 AAV 載體基因組和質(zhì)粒 DNA），導(dǎo)致產(chǎn)量降低、純度下降，更重要的是可能影響最終基因治療產(chǎn)品的安全性和治療效果。因此，常規(guī)監(jiān)測核酸內(nèi)切酶水平對(duì)于保障產(chǎn)品完整性和維持治療效果至關(guān)重要。

檢測原理

該核酸內(nèi)切酶 ELISA 試劑盒采用微孔板形式進(jìn)行雙抗夾心 ELISA 檢測，具體流程如下：

微孔板的孔中包被有特異性單克隆捕獲抗體，用于捕獲樣品（如細(xì)胞裂解液或純化病毒制劑）中存在的粘質(zhì)沙雷氏菌來源的核酸內(nèi)切酶。捕獲的核酸內(nèi)切酶通過兩步法進(jìn)行檢測：

1.生物素偶聯(lián)的單克隆檢測抗體（抗體偶聯(lián)物）與固定化的核酸內(nèi)切酶結(jié)合。

2.鏈霉親和素 - 過氧化物酶偶聯(lián)物（HRP 偶聯(lián)物）與生物素分子結(jié)合。

加入底物溶液（TMB，四甲基聯(lián)苯胺）后會(huì)發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與孔中分析物（核酸內(nèi)切酶）的濃度成正比。通過光度法在 450 nm 波長下（參比波長為 620–690 nm）測量吸光度。未知樣品中的核酸內(nèi)切酶濃度可根據(jù)相應(yīng)的 DENARASE® 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。

為何選擇本核酸內(nèi)切酶 ELISA 試劑盒？

•即用型：提供預(yù)包被微孔板及所有必需試劑

•超高靈敏度檢測：由高特異性單克隆抗體實(shí)現(xiàn)，靈敏度高于競品試劑盒

•省時(shí)高效：檢測時(shí)間縮短約一半，總孵育時(shí)間約 2 小時(shí)

•寬動(dòng)態(tài)范圍：32 pg/ml 至 1000 pg/ml（450 nm 波長處吸光度值）

• 檢測限（LOD）：4 pg/ml

•定量限（LOQ）：12 pg/ml

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