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            活細(xì)胞的免疫熒光染色方案

            發(fā)布時間:2018/7/25點擊次數(shù):3002

            ESI BIO的使命是成為客戶信賴的合作伙伴,將科學(xué)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為診所。我們通過提供突破性的干細(xì)胞技術(shù)作為研究級和治療級產(chǎn)品來實現(xiàn)這一目標(biāo),從研究到診所的照明,以幫助我們的客戶實現(xiàn)他們治療疾病的目標(biāo)。

            ESI BIO建立在豐富的創(chuàng)新和科學(xué)的基礎(chǔ)之上。我們于2000年在新加坡成立了ES Cell International,在那里我們通過制造個可翻譯的臨床級胚胎干細(xì)胞系來創(chuàng)建歷史,以便分發(fā)給研究界。

             

            ESI BIO現(xiàn)在開展業(yè)務(wù)Alameda CA. 我們是BioTime,Inc。擁有的以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的子公司的驕傲家族的成員,我們從中受益于的科學(xué),知識產(chǎn)權(quán)和干細(xì)胞技術(shù)的深層來源。

            抗體

             

            胚胎干細(xì)胞(ESCs)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)的表征是干細(xì)胞研究中的關(guān)鍵步驟。驗證起始細(xì)胞群的常規(guī)過程應(yīng)該簡單,快速,重要的是可靠,以確保準(zhǔn)確和一致的結(jié)果。ESI BIO為您提供關(guān)鍵抗體形式和活體染色工具,這些工具專為干細(xì)胞直接開發(fā)和測試而開發(fā)。

            快速而可靠的多能性驗證
            ESI BIO的BioLite™抗體可直接染色培養(yǎng)液中的活細(xì)胞,因此無需犧牲可用于下游實驗的有價值物質(zhì)。

            · 確認(rèn)多能性標(biāo)志物表達(dá)

            · 允許在染色后繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)

            · 低內(nèi)毒素,不含Sodium azide的配方

            · 無需固定或透化,僅需孵育30分鐘

             



            圖1. [A]小鼠ES細(xì)胞的IF分析。用BioLite SSEA-1(Dy-Light 488)抗體染色后培養(yǎng)細(xì)胞和相同視野的相差圖。[B] IF重組成人成纖維細(xì)胞第11天的原代iPS細(xì)胞集落的IF分析。用BioLite TRA-1-81(DyLight 488)抗體染色后培養(yǎng)細(xì)胞和相同視野的相差圖。以10X放大率拍攝圖像。

             

            活細(xì)胞的免疫熒光染色方案  見附件

            活細(xì)胞免疫熒光染色

            描述

            本協(xié)議描述了用BiLite™抗體直接免疫熒光(IF)染色活細(xì)胞的方法。所有的步驟都應(yīng)該在無菌的工作環(huán)境中進(jìn)行。 g新鮮培養(yǎng)基。請注意:

            次使用一種抗體時,建議對抗體進(jìn)行滴定,以達(dá)到特定于細(xì)胞類型的*性能。

            ·細(xì)胞可以在多孔板中直接生長、處理和染色。·只需在生物安全柜中打開抗體,以防止可能的污染。

            ·保護(hù)熒光共軛物不受光線照射。所需材料

            所需設(shè)備

            -BioLiteTM抗體(CAT)。否ST11006或貓。否ST11008)

            37°C和5% CO2培養(yǎng)箱

            細(xì)胞培養(yǎng)基

            熒光顯微鏡

            ·多能干細(xì)胞

            實驗協(xié)議

            參考技術(shù)數(shù)據(jù)表中推薦的起始濃度,并滴定一次抗體,以獲得*的細(xì)胞類型性能。

            原抗體在新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基中稀釋至確定的*濃度

            將培養(yǎng)液從細(xì)胞孔中吸出染色,直接將稀釋后的抗體加入活細(xì)胞的培養(yǎng)井中。

            在37℃下用5%CO2孵化器孵育30分鐘。

            吸出一次抗體,用新鮮培養(yǎng)基輕輕沖洗兩次。

            向井內(nèi)加入新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基。

            用熒光顯微鏡和適當(dāng)?shù)臑V鏡檢查細(xì)胞。

            8.將細(xì)胞返回孵化器并繼續(xù)正常培養(yǎng)。

            BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL 

            通過免疫熒光染色檢測活的,未固定的多能干細(xì)胞群中的SSEA-1表達(dá)。

             

            ST11006

             

            BioLite™表面標(biāo)記允許對活的,未固定的多能干細(xì)胞群進(jìn)行直接免疫熒光染色??贵w經(jīng)過細(xì)致的應(yīng)用測試和驗證,以確保它們是無菌的,無毒的,不含Sodium azide,并且不含培養(yǎng)病原體。與未處理的細(xì)胞相比,用BioLite抗體染色的菌落能夠在培養(yǎng)中繼續(xù),對增殖和分化潛能沒有不利影響。

            背景技術(shù)階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)是在早期小鼠胚胎,鼠胚胎癌(EC),鼠胚胎干(ES)和鼠和人胚(EG)細(xì)胞表面上表達(dá)的碳水化合物表位。未分化的人EC和ES細(xì)胞沒有明顯的免疫反應(yīng)性。人EC的分化導(dǎo)致SSEA-1表達(dá)的增加,而小鼠的表達(dá)減少。SSEA-1與細(xì)胞粘附,遷移和分化有關(guān)。

             

            濃度 0.5毫克/毫升

            物種反應(yīng)性 人類,老鼠

            主辦 小鼠單克隆

            克隆 MC-480

            同型 IgM,κ

            免疫原 F9四角癌干細(xì)胞(X射線照射)

            公式 0.2μm過濾滅菌的磷酸鹽緩沖溶液,pH 7.2,不含防腐劑。通過LAL測試確定,內(nèi)毒素水平<0.1EU /μg蛋白質(zhì)(<0.01ng /μg蛋白質(zhì))。配方不含細(xì)菌,真菌和支原體。

            儲存和穩(wěn)定性 儲存在2-8°C避光。根據(jù)指示存放,自收到之日起6個月內(nèi)穩(wěn)定。

            BioLite格式不含防腐劑,因此必須在無菌條件下處理。

            應(yīng)用程序測試 對活的,未固定的小鼠ES細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光(IF)

            推薦的稀釋液 免疫熒光1:100

            流式細(xì)胞儀1:100

            建議針對每種應(yīng)用滴定抗體以獲得*性能。

            替代名稱 CD15,階段特異性胚胎抗原1

             

             

            貨號

            品名

            規(guī)格

            品牌

            ST11006

            BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

            ST11008

            BioLite™ TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody, 100 μL

             100 μL

            esibio

            ST11023

            Nestin anti-Human Antibody, 100 μL

             100 μL

            esibio

            ST11003

            Oct4 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

             ST11001

            Sox2 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

            ST11013

            SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

             ST11014

            SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

            ST11015

            SSEA-4 anti-Human Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

            ST11018

            TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody, 100 μL

             100 μL

            esibio

            ST11016

            TRA-1-60 anti-Human Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

            ST11017

            TRA-1-81 anti-Human Antibody, 100 µL

             100 µL

            esibio

             ES-700

            ESI-017 Human Embryonic Stem Cell Line

            ea

            esibio

            ES-701

            ESI-035 Human Embryonic Stem Cell Line

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            esibio

             ES-702

            ESI-049 Human Embryonic Stem Cell Line

            ea

            esibio

            ES-703

            ESI-051 Human Embryonic Stem Cell Line

            ea

            esibio

            ES-704

            ESI-053 Human Embryonic Stem Cell Line

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            esibio

            ES-706

            Human Embryonic Stem Cell Bundle

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            esibio

             

             

            上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

            1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

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            7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發(fā),歡迎合作。

             

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