使用PNA miRNA抑制劑的方案

PNA BIO INC致力于為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室提供的研究產(chǎn)品和服務(wù)。

PNA Bio提供PNA（Peptide Nucleic Acid）產(chǎn)品，包括定制寡核苷酸，F(xiàn)ISH探針，miRNA抑制劑，PNA鉗夾探針和Fmoc單體。HPLC純化后，它們與MS / MS數(shù)據(jù)一起提供> 95％的純度。PNA產(chǎn)品由Panagene制造。

PNA Bio還提供工程化核酸酶服務(wù)，包括CRISPR / Cas9核酸酶（RGEN）合成，驗(yàn)證和Cas9蛋白以及敲除和敲入細(xì)胞系服務(wù)。

PNATM miRNA抑制劑   PNA miRNA Inhibitors

由于PNA比DNA或RNA更強(qiáng)地結(jié)合互補(bǔ)RNA，因此相對(duì)于基于RNA / DNA的miRNA抑制劑，它提供了更高的活性。此外，PNA miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽（CPP）結(jié)合，使其無需轉(zhuǎn)染試劑即可進(jìn)入細(xì)胞。
已經(jīng)顯示PNA miRNA抑制劑的使用是體內(nèi)有價(jià)值的工具。

主要特征

 PNAs™miRNA抑制劑具有高度序列特異性

 可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

 可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

 PNAs™miRNA抑制劑在細(xì)胞中具有長(zhǎng)的半衰期，長(zhǎng)達(dá)14天

 PNAs™miRNA抑制劑具有抗性和非常穩(wěn)定的細(xì)胞核酸酶

 PNAs™miRNA抑制劑沒有細(xì)胞毒性

使用PNA miRNA抑制劑的方案

PNATM miRNA抑制劑是針對(duì)成熟形式的miRNA而設(shè)計(jì)的。由于pna相對(duì)于dna具有較好的親和力和特異性，是一種理想的分子生物學(xué)工具。 證明miRNA作為一種抗感試劑的作用。

我們的PNATM miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽結(jié)合，只需將其添加到培養(yǎng)基中即可進(jìn)入細(xì)胞。使用轉(zhuǎn)染試劑可促進(jìn)穿透。 miRNA抑制劑進(jìn)入細(xì)胞。一般情況下，4~6小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)可見PNA miRNA抑制劑。大效應(yīng)出現(xiàn)在24~48小時(shí)之間。因?yàn)镻NA對(duì)核酸酶和Pr都有抗性 抑制作用持續(xù)一周以上。

PNA miRNA抑制劑的治療

細(xì)胞電鍍

1.轉(zhuǎn)染前1d，種子5.0×104細(xì)胞在0.5ml中接種24孔板，1.5×105細(xì)胞在1.5ml中接種6孔板，在合適的*培養(yǎng)基中不加抗生素。

在一夜之間培養(yǎng)細(xì)胞

PNA miRNA抑制劑的制備

順著含有miRNA抑制劑的管子旋轉(zhuǎn)。

在125升UL水溶液中，用50μL水或25毫摩爾回流10毫摩爾管，制成200μm原料。如果不*溶解，在60℃加熱5min。

商店里-70華氏度。

• PNA miRNA抑制劑如果保存得當(dāng)，其溶液應(yīng)穩(wěn)定在1年以上。

miRNA抑制劑的治療

(選項(xiàng))將每口井的培養(yǎng)基替換為優(yōu)選培養(yǎng)基，如OPTIMEM或*不含抗生素的培養(yǎng)基。

在60℃下加熱PNA miRNA抑制劑10 min。

在OPTI-MEM中制備miRNA抑制劑混合物，用或不加轉(zhuǎn)染試劑孵育15 min。

*在有轉(zhuǎn)染試劑的情況下，miRNA抑制劑的推薦濃度為0.2~0.5μm(每200 ul培養(yǎng)基0.5ul)，或1~2μm未轉(zhuǎn)染試劑。

向細(xì)胞中加入miRNA混合物。

細(xì)胞孵育48小時(shí)。

*宜條件將由用戶根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

• 實(shí)時(shí)PCR評(píng)價(jià)

• 從培養(yǎng)的細(xì)胞中去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

• 根據(jù)制造商的指示，分別使用PureLink™RNA試劑盒或miRNA分離試劑盒(LifeTechnologies)從樣品中提取總RNA或miRNA。

• **不使用TrIZOL進(jìn)行總RNA提取，因?yàn)镻NA-miRNA復(fù)合物被TrIZOL解離。

• 三。使用TaqMan®microRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Apple BioSosits）進(jìn)行10 ng總RNA或miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。TaqMan®Unvior的實(shí)時(shí)PCR反應(yīng) AL PCR碩士混合（應(yīng)用生物系統(tǒng)）根據(jù)制造商的指示。

參考

Oh SY et al. (2010) PNA-based antisense oligonucleotides for micrornas inhibition in the absence of a transfection reagent. Oligonucleotides 20(5):225-30.

Fabbri E et al. (2011) Modulation of the Biological Activity of microRNA-210 with Peptide Nucleic Acids (PNAs). Chem Med Chem 6(12):2192-2202.

Jiang L et al. (2011) Identification and experimental validation of G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2(GNAI2) as a microRNA-138 target in tongue squamous cell carcinoma. Hum Genet 129(2):189-97

Gaglione M et al. (2011) PNA-based artificial nucleases as antisense and antimiRNA oligonucleotide agents. Mol Biosyst 7(8):2490-9

Pnabio 部分產(chǎn)品列表

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商

1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

2：產(chǎn)品種類齊全，經(jīng)營(yíng)超過700多品牌，基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。

3：提供加急服務(wù)，貨品一般1-2周到貨。

4：富有競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì)。

5：多年積累良好的信譽(yù)，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國(guó)藥、fisher等知藥企。

6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。

7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。

Pnabio代理   Pnabio中國(guó)代理   Pnabio北京代理     Pnabio上海代理